Bộ dụng cụ RT-PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò virus viêm gan chuột

[Tên sản phẩm]Định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò virus viêm gan chuột Bộ dụng cụ RT-PCR

Tên：ChuộtViêm gan Virus (MHV) ProbegRT-PCRKit

[Thông số kỹ thuật đóng gói]50 lần/hộp

【Mục đích sử dụng)Virus viêm gan ở chuột(MouseHepatitisVirus, MHV) là một loại virus RNA, virus tồn tại trong máu và các cơ quan nội tạng, đặc biệt là gan và thận, cũng được tìm thấy trong phân và nước tiểu, có tính lây nhiễm cao ở chuột con, viêm gan chuột là một bệnh truyền nhiễm do MHV gây ra 1 loại, chuột có độc phân bố ở chuột, nhưng trong điều kiện bình thường chủ yếu là nhiễm trùng không rõ ràng, chỉ dưới sự kích thích của các yếu tố căng thẳng mới có thể trở thành bệnh chết người, chủ yếu là viêm gan và viêm não, do đó việc xác định nhanh chóng và chính xác virus viêm gan chuột có vai trò quan trọng trong việc phòng ngừa và kiểm dịch bệnh này. Sản phẩm này là một bộ dụng cụ đặc biệt để phát hiện virus viêm gan chuột được phát triển trên cơ sở công nghệ RT-PCR huỳnh quang định lượng của phương pháp thăm dò. Nó có các tính năng sau:

1. Bật và chạy, người dùng chỉ cần cung cấp mẫu RNA mẫu.

2. mồi và thăm dò được tối ưu hóa, độ nhạy cao.

3. Cung cấp kiểm soát dương tính để dễ dàng phân biệt các mẫu âm tính giả.

4. Tính đặc hiệu cao, mồi được thiết kế theo khu bảo tồn cao của virus viêm gan chuột, không phản ứng chéo với RNA của các virus khác.

5. Sản phẩm này đủ 50 lần phản ứng RT-PCR định lượng huỳnh quang bằng phương pháp thăm dò của hệ thống 20μL.

6. Sản phẩm này chỉ có thể được sử dụng trong nghiên cứu khoa học.

[Thông số kỹ thuật và thành phần]

【Vận chuyển và bảo quản】vận chuyển nhiệt độ thấp,- Bảo quản 20 ℃, thời gian bảo quản là 12 tháng.

【Thuốc thử tự chuẩn bị】mẫu vật RNa.

Bộ dụng cụ RT-PCR định lượng huỳnh quang Phương pháp thăm dò virus viêm gan chuột[Phương pháp sử dụng]I. Pha loãng mẫu đường cong tiêu chuẩn (Lấy ví dụ 10E2-10E6 bản sao/μL 6 pha loãng gấp 10 lần) Do nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn rất cao, các hoạt động pha loãng sau đây phải được thực hiện trong một khu vực độc lập, không được làm ô nhiễm mẫu hoặc các thành phần khác của bộ dụng cụ này. Để tăng sự ổn định của sản phẩm và tránh lây lan các mầm bệnh truyền nhiễm, sản phẩm này không cung cấp các mẫu sống để kiểm soát dương tính, chỉ các mảnh DNA không lây nhiễm làm kiểm soát dương tính.

1. Đánh dấu 6 ống ly tâm, tương ứng là 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. Sử dụng đầu súng có lõi để thêm 45 μL huỳnh quang PCR mẫu đặc biệt pha loãng dung dịch (tốt nhất là sử dụng đầu súng có lõi, dưới cùng).

Thêm 5 μL1 × 10E7 bản sao/μL kiểm soát dương tính (bộ dụng cụ cung cấp) vào ống số 6, chấn động đầy đủ trong 1 phút, thu được 1 × 10E7 bản sao/μL mẫu đường cong tiêu chuẩn. Cứ để đá chờ.

Thay đầu súng, thêm vào ống số 5 bản sao 5μL1 × 10E6/μL đối chiếu dương tính (kết quả pha loãng ở bước trên), chấn động đầy đủ trong 1 phút, thu được 1 × 10E5 bản sao/μL mẫu đường cong tiêu chuẩn. Cứ để đá chờ.

Thay đầu súng, thêm vào ống số 4 5 μL1 × 10E5 bản sao/μL đối chiếu dương tính (kết quả pha loãng ở bước trên), chấn động đầy đủ trong 1 phút, thu được 1 × 10E5 bản sao/μL mẫu đường cong tiêu chuẩn. Cứ để đá chờ.

Lặp lại thao tác trên cho đến khi bạn có được 6 mẫu đường cong tiêu chuẩn pha loãng. Dùng trên đá.

II. Mẫu Sản phẩm RNAChuẩn bị

7 . Nếu có N mẫu, tốt nhất là thiết lập N+2 mẫu trích xuất, nhiều hơn một là PC (mẫu chuẩn bị dương tính), một là NC (mẫu chuẩn bị âm tính). Nó có thể được pha loãng 10.000 lần so với 10 μL tích cực kiểm soát cộng với một lượng nước nhất định để làm cho tổng thể tích như thể tích yêu cầu cho mỗi lần chuẩn bị như một máy tính. Sử dụng nước như NC

8 . Tinh chế RNA của mẫu bằng phương pháp tự chọn, bộ dụng cụ này tương thích với hầu hết các bộ dụng cụ chiết xuất RNA virus trên thị trường。

baPhản ứng ProbeqRT-PCR(Hệ thống 20μL, được thực hiện trong phòng chuẩn bị mẫu)

9 . Nếu bạn thực hiện phân tích định lượng và chỉ thực hiện 1 lần lặp lại, hãy đánh dấu N+9 ống PCR, trong đó N+2 cho N+2 mẫu thu được ở bước trên, 1 cho kiểm soát PCR âm tính (làm khuôn với nước) và 6 cho đường cong tiêu chuẩn. Nếu bạn thực hiện phân tích định tính và chỉ thực hiện 1 lần lặp lại, hãy đánh dấu N+4 ống PCR, trong đó N+2 cho N+2 mẫu thu được ở bước trên, 1 cho đối chứng PCR âm tính (làm khuôn với nước) và 1 cho đối chứng PCR dương tính (làm khuôn với dung dịch pha loãng đối chứng dương tính trong ống số 4). Sau đây chỉ lấy phân tích định lượng làm mô tả các bước thao tác,

10 . Nhấn vào bảng trong ống đánh dấu để thêm các thành phần (bảng này chỉ liệt kê một lần lặp lại. Ống mẫu và kiểm soát âm tính được thiết lập sau khi kiểm soát dương tính được thiết lập, và mẫu kiểm soát dương tính phải đợi cho đến khi tất cả các ống được đậy nắp để lưu trữ và thêm vào cuối cùng)

11.Lên máy sau khi đậy nắp, theo các thông số bên dướiQRT-PCR:

IV: Xử lý dữ liệu

12. Nếu bộ dụng cụ này được sử dụng để kiểm tra định lượng, giá trị log của nồng độ kiểm soát dương tính là trục ngang và giá trị Ct là trục dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn. Sau đó, với giá trị Ct của mẫu được đo, giá trị log của nồng độ RNA của mẫu được suy ra từ đường cong chuẩn và nồng độ của nó được suy ra.

13 . Nếu bộ dụng cụ này được sử dụng để xét nghiệm định tính và chỉ đánh giá dương tính hoặc âm tính, Ct kiểm soát âm tính phải lớn hơn hoặc bằng 40. Kiểm soát dương tính phải có sự tăng trưởng logarit huỳnh quang với đường cong khuếch đại điển hình và giá trị Ct phải nhỏ hơn hoặc bằng 30. Đối với mẫu thử nghiệm, âm tính nếu Ct lớn hơn hoặc bằng 40 và dương tính nếu nhỏ hơn hoặc bằng 35. Lặp lại nếu nó nằm trong khoảng 35-40. Giá trị Ct của thí nghiệm lặp lại là âm tính nếu lớn hơn hoặc bằng 40 và dương tính nếu nhỏ hơn 35.