Tế bào nội mô vi mạch phổi người

Tất cả các sản phẩm của công ty chỉ dành cho thí nghiệm khoa học, không sử dụng ngoài các thí nghiệm khoa học khác!

Nội mô vi mạch phổi của con người được phân lập từ mô phổi; Phổi là cơ quan hô hấp của cơ thể, nằm trong lồng ngực, mỗi bên trái phải, bao phủ trên tim. Phổi có phân thùy, trái hai phải ba, tổng cộng năm thùy. Phổi (chỉ khí quản, phế quản......) nối liền với cổ họng, mũi, cho nên gọi là cửa ngõ của phổi, mũi là khiếu ngoài phổi. Các tế bào nội mô vi mạch tham gia chặt chẽ vào một loạt các phản ứng sinh lý và viêm bao gồm tái tạo, phát triển, chữa lành vết thương. Các tế bào có hình thoi hoặc đa giác và sắp xếp giống như sỏi hoặc lát đá sau khi hình thành một lớp đơn. Các tế bào nội mô vi mạch phổi tạo thành một rào cản bán chọn lọc có ý nghĩa quan trọng đối với trao đổi khí phổi và điều chỉnh dòng chảy của chất lỏng và các chất hòa tan giữa máu và kẽ phổi.

Giới thiệu phương pháp:

Nội mô vi mạch phổi người được phân lập trong phòng thí nghiệm được chuẩn bị bằng phương pháp dán mô và kết hợp với sàng lọc nuôi cấy tế bào nội mô đặc biệt, với tổng lượng tế bào khoảng 5 × 10 ⁵cells/lọ.

Kiểm tra chất lượng:

Nội mô vi mạch phổi người được phân lập trong phòng thí nghiệm được xác định bằng huỳnh quang miễn dịch CD31, độ tinh khiết có thể đạt trên 90% và không chứa HIV-1, HBV, HCV, mycoplasma, vi khuẩn, nấm men và nấm, v.v.

Điều kiện góiPLL (0,1 mg/ml) hoặc gelatin (0,1%)

Môi trườngVới FBS, phụ gia tăng trưởng, Penicillin, Streptomycin, vv

Tần số thay đổi chất lỏngThay đổi chất lỏng mỗi 2-3 ngày

Đặc tính tăng trưởngDán tường

Hình thái tế bàoGiống tế bào nội mô

Đặc điểm truyền tảiCó thể truyền 2-3 thế hệ

Dịch tiêu hóa0.25%

Chuẩn bị

1. Chuẩn bị thiết bị thí nghiệm: Chuẩn bị đĩa petri vô trùng, chai petri, pipet, ống ly tâm, dụng cụ phẫu thuật, v.v. và thực hiện khử trùng bằng nồi hấp hoặc các phương pháp khử trùng thích hợp khác.

2. Chuẩn bị thuốc thử: Xây dựng hoặc mua thuốc thử thích hợp cho môi trường, enzyme tiêu hóa (ví dụ, collagen, v.v.), huyết thanh bò thai, kháng kép, v.v., để đảm bảo nó vô trùng và trong ngày hết hạn.

3. Chuẩn bị động vật thí nghiệm hoặc nguồn mô: theo nhu cầu thí nghiệm, chọn động vật thích hợp và gây mê hoặc tử hình tương ứng, lấy mô mong muốn; Hoặc lấy mô từ một thư viện mẫu mô đã có.

Khai thác và xử lý

1. Lấy vật liệu: Trong điều kiện vô trùng, nhanh chóng loại bỏ mô mục tiêu, giảm thiểu thiệt hại cho mô và loại bỏ chất béo dư thừa, mô liên kết và các mô không mục đích khác.

2. Rửa sạch: Rửa sạch các mô lấy ra nhiều lần với PBS vô trùng được làm lạnh trước để loại bỏ máu và tạp chất.

Cắt: Cắt mô thành các miếng nhỏ khoảng 1-2mm³ để tiêu hóa tiếp theo.

Tách tế bào

1. Tiêu hóa: Đặt các khối mô bị cắt nhỏ vào ống ly tâm có chứa một lượng enzyme tiêu hóa vừa phải, tiêu hóa trong một thời gian trong máy lắc nhiệt độ không đổi 37 ℃ hoặc hộp nuôi cấy. Trong thời gian đó có thể nhẹ nhàng lay động ống ly tâm, làm cho tiêu hóa đều đặn hơn.

2. Chấm dứt tiêu hóa: Khi phần lớn các khối mô được tiêu hóa thành đình chỉ đơn bào hoặc các cụm tế bào nhỏ, việc bổ sung môi trường chứa huyết thanh chấm dứt tiêu hóa.

3. Lọc và ly tâm: Lọc đình chỉ tế bào bằng sàng tế bào, loại bỏ các mảnh mô không tiêu hóa, sau đó ly tâm bộ lọc với tốc độ quay thích hợp, thu thập lượng mưa tế bào.

Quan sát và phát hiện tế bào

1. Quan sát hàng ngày: quan sát hình thái, trạng thái tăng trưởng, mật độ của tế bào bằng kính hiển vi đảo ngược hàng ngày, ghi lại những thay đổi của tế bào, chẳng hạn như phát hiện ô nhiễm tế bào hoặc bất thường, thực hiện các biện pháp tương ứng kịp thời.
2. Số lượng tế bào và kiểm tra sức sống: Khi cần thiết, các phương pháp như nhuộm màu Taizhang và các phương pháp khác có thể được sử dụng để đếm và kiểm tra sức sống của tế bào để hiểu tình trạng tăng trưởng và sức khỏe của tế bào.

I. Lấy và tách

1. Hoạt động nhanh

- Cần xử lý ngay sau khi lấy mô, tránh tiếp xúc lâu với nhiệt độ phòng hoặc môi trường không dinh dưỡng.

- Rửa sạch mô bằng PBS vô trùng hoặc nước muối sinh lý để loại bỏ máu, tạp chất.

2. Lựa chọn enzyme tiêu hóa

- Chọn enzyme tiêu hóa theo loại mô, tránh tổn thương tế bào do tiêu hóa quá mức.

Thời gian tiêu hóa cần được kiểm soát chặt chẽ (thường là 10-30 phút) và trạng thái phân ly tế bào có thể được quan sát bằng kính hiển vi.

II. Tối ưu hóa điều kiện bồi dưỡng

1. Lựa chọn môi trường

- Sử dụng môi trường có chứa huyết thanh hoặc các yếu tố tăng trưởng cụ thể (ví dụ: DMEM, RPMI 1640, v.v.), một số tế bào cần thêm insulin, EGF, v.v.

- Tránh thường xuyên thay đổi thương hiệu môi trường hoặc lô, giảm áp lực thích nghi tế bào.

2. Dán tường và truyền lại

- Các tế bào thế hệ đầu có khả năng dán tường yếu và có thể cần bọc đĩa petri (ví dụ: collagen, polylysine).

- Mật độ thời gian truyền được khuyến nghị kiểm soát ở mức 70% -80%, hội tụ quá mức dẫn đến ức chế tiếp xúc và sự khác biệt.

III. Kiểm soát ô nhiễm

1. Hoạt động vô trùng

- Toàn bộ quá trình vận hành trên bàn siêu sạch, sử dụng vật tư tiêu hao một lần, tránh ô nhiễm chéo.

Kháng kép có thể được thêm vào môi trường nuôi cấy, nhưng sử dụng lâu dài có thể ảnh hưởng đến hoạt động của tế bào.

2. Xét nghiệm Mycoplasma

- Thường xuyên kiểm tra ô nhiễm Mycoplasma (ví dụ như phương pháp PCR), các tế bào cần được loại bỏ kịp thời sau khi bị ô nhiễm.

IV. Giám sát tình trạng

1. Quan sát hàng ngày

- Kiểm tra hình thái tế bào, mật độ và màu sắc môi trường hàng ngày, kịp thời thay thế môi trường (thường là 2-3 ngày một lần).

Các hình thái bất thường (chẳng hạn như các tế bào tròn, nhiều mảnh vỡ) có thể gợi ý ô nhiễm hoặc thiếu dinh dưỡng.

2. Truyền thừa và lưu trữ đông lạnh

Số lần phân chia tế bào nguyên thủy có hạn (bình thường 5 - 10 thế hệ), cần kịp thời đóng băng tế bào thế hệ đầu.

- Dung dịch đông lạnh được khuyến cáo sử dụng huyết thanh DMSO+(hoặc môi trường đông lạnh đặc biệt), bảo quản nitơ lỏng sau khi gradient làm mát.