Microglia thần kinh người

Tất cả các sản phẩm của công ty chỉ dành cho thí nghiệm khoa học, không sử dụng ngoài các thí nghiệm khoa học khác!

Microglia thần kinh người được phân lập từ mô não; Não chia làm hai bán cầu, vỏ não.Chất xám bao phủ hầu hết mọi bán cầu não, và đó là nơi các tế bào thần kinh tập trung. Bên trong là chất trắng do sợi thần kinh hoặc vỏ tủy cấu thành. Mỗi bán cầu có ba mặt, đó là mặt ngoài (khoảng 1/3 diện tích vỏ não), mặt trong và mặt dưới (2/3 diện tích); Bề mặt bán cầu có rất nhiều rãnh hoặc vết nứt nông khác nhau, các vết sưng giữa các rãnh hoặc vết nứt được gọi lại, chúng làm tăng đáng kể diện tích bề mặt của não; Các rãnh quan trọng ở phía bên ngoài của não, các vết nứt với các vết nứt bên ngoài não, các vết nứt trên gối và các rãnh trung tâm. Bởi vì phân cách ba rãnh, làm cho bộ não được chia thành bốn phần lớn là thùy trán, thùy đỉnh, thùy thái dương, thùy chẩm. Microglia là một loại tế bào thần kinh đệm, tương đương với đại thực bào trong não và tủy sống, là tuyến phòng thủ miễn dịch chính trong hệ thần kinh trung ương (CNS). Microglia chiếm khoảng 20% tế bào thần kinh đệm trong não, liên tục loại bỏ các dây thần kinh, mảng bám và các chất nhiễm trùng bị hư hỏng khỏi hệ thống thần kinh trung ương. Vô số nghiên cứu lâm sàng và thần kinh học đã chỉ ra rằng microglia kích hoạt đóng một vai trò quan trọng trong bệnh lý của các bệnh thoái hóa thần kinh như bệnh Parkinson, đa xơ cứng và Alzheimer. Nhưng quá nhiều microglia kích hoạt hoặc mất kiểm soát có thể gây độc thần kinh. Chúng là một nguồn tuyệt vời của các yếu tố gây viêm và stress oxy hóa, chẳng hạn như yếu tố hoại tử khối u (TNF), nitric oxide, interleukin và các chất gây độc thần kinh khác. Chức năng chính của tế bào thần kinh tiểu thần kinh đệm: ① Sự xuất hiện của chất thần kinh đệm trong quá trình chuyển đổi từ giai đoạn phát triển sớm của não sang giai đoạn trưởng thành; Khi các tế bào được lập trình chết, hoặc trong quá trình phát triển của não, hệ thống thần kinh trung ương bị tổn thương hoặc bị tổn thương bệnh lý, chất thần kinh đệm có thể là đại thực bào của não; ③ Tế bào thần kinh đệm có thể biểu hiện kháng nguyên khi biểu hiện tế bào T dương tính CD-4 trong phức hợp tương thích mô loại II, có thể thực hiện tác dụng macrophagy qua trung gian Fc và chia sẻ kháng nguyên với các tế bào tạo máu và mô đại thực bào.
Giới thiệu phương pháp:

Phòng thí nghiệm của công ty cô lập microglia thần kinh con người sử dụng phương pháp tiêu hóa enzyme kết hợp với phương pháp dán tường vi sai. Sau vài ngày thiếu dinh dưỡng trong môi trường nuôi cấy, các tế bào rụng được chuẩn bị bằng cách thu thập chấn động lắc. Tổng số tế bào là khoảng5×10? Cells/chai
Kiểm tra chất lượng:

Phòng thí nghiệm của công ty cô lập thần kinh đệm con ngườiCD11b miễn dịch huỳnh quang xác định, độ tinh khiết có thể đạt hơn 90%, và không chứa HIV-1, HBV, HCV, mycoplasma, vi khuẩn, nấm men và nấm, v.v.

Môi trường hàmFBS、 Phụ gia tăng trưởng, Penicillin, Streptomycin, vv

Tần số thay đổi chất lỏng mỗi2-3 ngày thay đổi chất lỏng một lần

Đặc tính tăng trưởng Dán tường

Hình thái tế bào Hình thoi, đa giác

Đặc điểm truyền tải thuộc về các tế bào biệt hóa cuối cùng; Thuộc nhóm tế bào không tăng sinh

Dịch tiêu hóa Nguyễn Mai Thảo (12 mM)

Điều kiện nuôi dưỡng Pha khí: Không khí,95%； CO2, 5%

Chuẩn bị

1. Chuẩn bị thiết bị thí nghiệm: Chuẩn bị đĩa petri vô trùng, chai petri, pipet, ống ly tâm, dụng cụ phẫu thuật, v.v. và thực hiện khử trùng bằng nồi hấp hoặc các phương pháp khử trùng thích hợp khác.

2. Chuẩn bị thuốc thử: Xây dựng hoặc mua thuốc thử thích hợp cho môi trường, enzyme tiêu hóa (ví dụ, collagen, v.v.), huyết thanh bò thai, kháng kép, v.v., để đảm bảo nó vô trùng và trong ngày hết hạn.

3. Chuẩn bị động vật thí nghiệm hoặc nguồn mô: theo nhu cầu thí nghiệm, chọn động vật thích hợp và gây mê hoặc tử hình tương ứng, lấy mô mong muốn; Hoặc lấy mô từ một thư viện mẫu mô đã có.

Khai thác và xử lý

1. Lấy vật liệu: Trong điều kiện vô trùng, nhanh chóng loại bỏ mô mục tiêu, giảm thiểu thiệt hại cho mô và loại bỏ chất béo dư thừa, mô liên kết và các mô không mục đích khác.

2. Rửa sạch: Rửa sạch các mô lấy ra nhiều lần với PBS vô trùng được làm lạnh trước để loại bỏ máu và tạp chất.

Cắt: Cắt mô thành các miếng nhỏ khoảng 1-2mm³ để tiêu hóa tiếp theo.

Tách tế bào

1. Tiêu hóa: Đặt các khối mô bị cắt nhỏ vào ống ly tâm có chứa một lượng enzyme tiêu hóa vừa phải, tiêu hóa trong một thời gian trong máy lắc nhiệt độ không đổi 37 ℃ hoặc hộp nuôi cấy. Trong thời gian đó có thể nhẹ nhàng lay động ống ly tâm, làm cho tiêu hóa đều đặn hơn.

2. Chấm dứt tiêu hóa: Khi phần lớn các khối mô được tiêu hóa thành đình chỉ đơn bào hoặc các cụm tế bào nhỏ, việc bổ sung môi trường chứa huyết thanh chấm dứt tiêu hóa.

3. Lọc và ly tâm: Lọc đình chỉ tế bào bằng sàng tế bào, loại bỏ các mảnh mô không tiêu hóa, sau đó ly tâm bộ lọc với tốc độ quay thích hợp, thu thập lượng mưa tế bào.

Quan sát và phát hiện tế bào

1. Quan sát hàng ngày: quan sát hình thái, trạng thái tăng trưởng, mật độ của tế bào bằng kính hiển vi đảo ngược hàng ngày, ghi lại những thay đổi của tế bào, chẳng hạn như phát hiện ô nhiễm tế bào hoặc bất thường, thực hiện các biện pháp tương ứng kịp thời.
2. Số lượng tế bào và kiểm tra sức sống: Khi cần thiết, các phương pháp như nhuộm màu Taizhang và các phương pháp khác có thể được sử dụng để đếm và kiểm tra sức sống của tế bào để hiểu tình trạng tăng trưởng và sức khỏe của tế bào.

I. Lấy và tách

1. Hoạt động nhanh

- Cần xử lý ngay sau khi lấy mô, tránh tiếp xúc lâu với nhiệt độ phòng hoặc môi trường không dinh dưỡng.

- Rửa sạch mô bằng PBS vô trùng hoặc nước muối sinh lý để loại bỏ máu, tạp chất.

2. Lựa chọn enzyme tiêu hóa

- Chọn enzyme tiêu hóa theo loại mô, tránh tổn thương tế bào do tiêu hóa quá mức.

Thời gian tiêu hóa cần được kiểm soát chặt chẽ (thường là 10-30 phút) và trạng thái phân ly tế bào có thể được quan sát bằng kính hiển vi.

II. Tối ưu hóa điều kiện bồi dưỡng

1. Lựa chọn môi trường

- Sử dụng môi trường có chứa huyết thanh hoặc các yếu tố tăng trưởng cụ thể (ví dụ: DMEM, RPMI 1640, v.v.), một số tế bào cần thêm insulin, EGF, v.v.

- Tránh thường xuyên thay đổi thương hiệu môi trường hoặc lô, giảm áp lực thích nghi tế bào.

2. Dán tường và truyền lại

- Các tế bào thế hệ đầu có khả năng dán tường yếu và có thể cần bọc đĩa petri (ví dụ: collagen, polylysine).

- Mật độ thời gian truyền được khuyến nghị kiểm soát ở mức 70% -80%, hội tụ quá mức dẫn đến ức chế tiếp xúc và sự khác biệt.

III. Kiểm soát ô nhiễm

1. Hoạt động vô trùng

- Toàn bộ quá trình vận hành trên bàn siêu sạch, sử dụng vật tư tiêu hao một lần, tránh ô nhiễm chéo.

Kháng kép có thể được thêm vào môi trường nuôi cấy, nhưng sử dụng lâu dài có thể ảnh hưởng đến hoạt động của tế bào.

2. Xét nghiệm Mycoplasma

- Thường xuyên kiểm tra ô nhiễm Mycoplasma (ví dụ như phương pháp PCR), các tế bào cần được loại bỏ kịp thời sau khi bị ô nhiễm.

IV. Giám sát tình trạng

1. Quan sát hàng ngày

- Kiểm tra hình thái tế bào, mật độ và màu sắc môi trường hàng ngày, kịp thời thay thế môi trường (thường là 2-3 ngày một lần).

Các hình thái bất thường (chẳng hạn như các tế bào tròn, nhiều mảnh vỡ) có thể gợi ý ô nhiễm hoặc thiếu dinh dưỡng.

2. Truyền thừa và lưu trữ đông lạnh

Số lần phân chia tế bào nguyên thủy có hạn (bình thường 5 - 10 thế hệ), cần kịp thời đóng băng tế bào thế hệ đầu.

- Dung dịch đông lạnh được khuyến cáo sử dụng huyết thanh DMSO+(hoặc môi trường đông lạnh đặc biệt), bảo quản nitơ lỏng sau khi gradient làm mát.