Nguyên bào sợi buồng trứng người

Tất cả các sản phẩm của công ty chỉ dành cho thí nghiệm khoa học, không sử dụng ngoài các thí nghiệm khoa học khác!

Nguyên sợi buồng trứng người được phân lập từ mô buồng trứng; Buồng trứng là cơ quan sinh sản của động vật cái và chức năng của buồng trứng là sản xuất trứng cũng như hormone steroid. Vị trí buồng trứng giống như tinh hoàn, chỉ phát triển bên trái (bên phải đã thoái hóa), có hình nho, đều là nang trứng ở thời kỳ phát triển khác nhau, nang trứng có màu vàng, bề mặt buồng trứng dày đặc mạch máu. Kích thước buồng trứng có liên quan đến tuổi tác và thời gian đẻ trứng. Hầu hết các động vật có xương sống có hai buồng trứng, nhưng một số loài cá có hai buồng trứng hợp nhất thành một cấu trúc duy nhất, trong khi tất cả các loài chim chỉ có buồng trứng bên trái. Buồng trứng là một cặp cơ quan sinh dục hình tròn trứng nằm ở hai bên tử cung, có một lớp mô biểu mô bên ngoài và một lớp mô liên kết mỏng bên dưới nó. Cấu trúc bên trong buồng trứng có thể được chia thành vỏ não và tủy. Vỏ não nằm ở phần xung quanh của buồng trứng, chủ yếu bao gồm nang trứng và mô liên kết; Tủy nằm ở trung tâm và được tạo thành từ mô liên kết lỏng, trong đó có nhiều mạch máu, mạch bạch huyết và dây thần kinh. Hạt chia organic (Fibroblast) là thành phần tế bào chính của mô liên kết lỏng, được phân biệt bởi các tế bào trung mô trong giai đoạn phôi; Nguyên bào sợi lớn hơn, đường nét rõ ràng, đa số là kết cấu phẳng hình thoi hoặc hình ngôi sao nổi lên, nhân tế bào có hình tròn trứng quy tắc, nhân lớn và rõ ràng. Hoạt động chức năng của nguyên bào sợi là mạnh mẽ, chất tế bào là kiềm yếu, có hoạt động tổng hợp và tiết protein rõ ràng, trong một số điều kiện nhất định, nó có thể đạt được sự chuyển đổi lẫn nhau với các tế bào sợi; Nguyên bào sợi có tác dụng hết sức quan trọng đối với mức độ biến tính tế bào, hoại tử và sửa chữa tổn thương mô khác nhau. Các nguyên bào sợi buồng trứng vừa được phân lập có hình tròn, gấp khúc tốt và lơ lửng trong môi trường nuôi cấy. 30 phút tế bào được dán vào tường, trong đó một phần bắt đầu nhô ra khỏi chân giả, biểu hiện dưới dạng các vết sưng nhỏ; 6h sau khi tế bào cơ bản dán tường wan đầy đủ, kéo dài thành hình thoi, nhân tế bào rõ ràng, phân bố đồng đều hơn, phân tán trong sự phát triển, không tụ tập thành khối; Tế bào phát triển nhanh chóng, 5 - 7 ngày là ở trạng thái dung hợp, tế bào sắp xếp chặt chẽ, có tế bào chồng chéo lên nhau, bằng phẳng, tế bào lớn hơn, tế bào chất trong suốt, nhân tế bào lớn hơn, hình bầu dục, màu nhạt. Các tế bào hợp nhất và kết nối với nhau thành lưới; Sự phân bố phẳng của các tế bào hình thoi hoặc hình ngôi sao nổi lên. Nguyên bào sợi buồng trứng chủ yếu được phân bố trên bề mặt buồng trứng, đặc điểm và chức năng chính của chúng: ① Nguyên bào sợi dễ nuôi cấy bên ngoài cơ thể; b) Sau khi buồng trứng bị tổn thương, nguyên bào sợi có thể sửa chữa và tái tạo buồng trứng; Bệnh viêm buồng trứng có thể kiểm soát hiệu quả sự lây lan của bệnh viêm.
Giới thiệu phương pháp:

Phòng thí nghiệm của công ty tách nguyên bào buồng trứng người áp dụngPhương pháp tiêu hóa hỗn hợp yi protease-collagen kết hợp với phương pháp dán tường vi sai, tổng lượng tế bào khoảng 5 × 10. Cells/chai
Kiểm tra chất lượng:

Nguyên bào sợi buồng trứng của con người tách ra từ phòng thí nghiệm của công tyVimentin miễn dịch huỳnh quang được xác định với độ tinh khiết lên đến 90% và không chứa HIV-1, HBV, HCV, mycoplasma, vi khuẩn, nấm men và nấm.

Môi trường hàmFBS、 Phụ gia tăng trưởng, Penicillin, Streptomycin, vv

Tần số thay đổi chất lỏng mỗi2-3 ngày thay đổi chất lỏng một lần

Đặc tính tăng trưởng Dán tường

Hình thái tế bào Giống như nguyên bào sợi

Đặc điểm truyền tải Có thể truyềnKhoảng 5 thế hệ; Tình trạng trong vòng 3 thế hệ

Dịch tiêu hóa 0,25% của yi protease

Điều kiện nuôi dưỡng Pha khí: Không khí,95%； CO2, 5%

Chuẩn bị

1. Chuẩn bị thiết bị thí nghiệm: Chuẩn bị đĩa petri vô trùng, chai petri, pipet, ống ly tâm, dụng cụ phẫu thuật, v.v. và thực hiện khử trùng bằng nồi hấp hoặc các phương pháp khử trùng thích hợp khác.

2. Chuẩn bị thuốc thử: Xây dựng hoặc mua thuốc thử thích hợp cho môi trường, enzyme tiêu hóa (ví dụ, collagen, v.v.), huyết thanh bò thai, kháng kép, v.v., để đảm bảo nó vô trùng và trong ngày hết hạn.

3. Chuẩn bị động vật thí nghiệm hoặc nguồn mô: theo nhu cầu thí nghiệm, chọn động vật thích hợp và gây mê hoặc tử hình tương ứng, lấy mô mong muốn; Hoặc lấy mô từ một thư viện mẫu mô đã có.

Khai thác và xử lý

1. Lấy vật liệu: Trong điều kiện vô trùng, nhanh chóng loại bỏ mô mục tiêu, giảm thiểu thiệt hại cho mô và loại bỏ chất béo dư thừa, mô liên kết và các mô không mục đích khác.

2. Rửa sạch: Rửa sạch các mô lấy ra nhiều lần với PBS vô trùng được làm lạnh trước để loại bỏ máu và tạp chất.

Cắt: Cắt mô thành các miếng nhỏ khoảng 1-2mm³ để tiêu hóa tiếp theo.

Tách tế bào

1. Tiêu hóa: Đặt các khối mô bị cắt nhỏ vào ống ly tâm có chứa một lượng enzyme tiêu hóa vừa phải, tiêu hóa trong một thời gian trong máy lắc nhiệt độ không đổi 37 ℃ hoặc hộp nuôi cấy. Trong thời gian đó có thể nhẹ nhàng lay động ống ly tâm, làm cho tiêu hóa đều đặn hơn.

2. Chấm dứt tiêu hóa: Khi phần lớn các khối mô được tiêu hóa thành đình chỉ đơn bào hoặc các cụm tế bào nhỏ, việc bổ sung môi trường chứa huyết thanh chấm dứt tiêu hóa.

3. Lọc và ly tâm: Lọc đình chỉ tế bào bằng sàng tế bào, loại bỏ các mảnh mô không tiêu hóa, sau đó ly tâm bộ lọc với tốc độ quay thích hợp, thu thập lượng mưa tế bào.

Quan sát và phát hiện tế bào

1. Quan sát hàng ngày: quan sát hình thái, trạng thái tăng trưởng, mật độ của tế bào bằng kính hiển vi đảo ngược hàng ngày, ghi lại những thay đổi của tế bào, chẳng hạn như phát hiện ô nhiễm tế bào hoặc bất thường, thực hiện các biện pháp tương ứng kịp thời.
2. Số lượng tế bào và kiểm tra sức sống: Khi cần thiết, các phương pháp như nhuộm màu Taizhang và các phương pháp khác có thể được sử dụng để đếm và kiểm tra sức sống của tế bào để hiểu tình trạng tăng trưởng và sức khỏe của tế bào.

I. Lấy và tách

1. Hoạt động nhanh

- Cần xử lý ngay sau khi lấy mô, tránh tiếp xúc lâu với nhiệt độ phòng hoặc môi trường không dinh dưỡng.

- Rửa sạch mô bằng PBS vô trùng hoặc nước muối sinh lý để loại bỏ máu, tạp chất.

2. Lựa chọn enzyme tiêu hóa

- Chọn enzyme tiêu hóa theo loại mô, tránh tổn thương tế bào do tiêu hóa quá mức.

Thời gian tiêu hóa cần được kiểm soát chặt chẽ (thường là 10-30 phút) và trạng thái phân ly tế bào có thể được quan sát bằng kính hiển vi.

II. Tối ưu hóa điều kiện bồi dưỡng

1. Lựa chọn môi trường

- Sử dụng môi trường có chứa huyết thanh hoặc các yếu tố tăng trưởng cụ thể (ví dụ: DMEM, RPMI 1640, v.v.), một số tế bào cần thêm insulin, EGF, v.v.

- Tránh thường xuyên thay đổi thương hiệu môi trường hoặc lô, giảm áp lực thích nghi tế bào.

2. Dán tường và truyền lại

- Các tế bào thế hệ đầu có khả năng dán tường yếu và có thể cần bọc đĩa petri (ví dụ: collagen, polylysine).

- Mật độ thời gian truyền được khuyến nghị kiểm soát ở mức 70% -80%, hội tụ quá mức dẫn đến ức chế tiếp xúc và sự khác biệt.

III. Kiểm soát ô nhiễm

1. Hoạt động vô trùng

- Toàn bộ quá trình vận hành trên bàn siêu sạch, sử dụng vật tư tiêu hao một lần, tránh ô nhiễm chéo.

Kháng kép có thể được thêm vào môi trường nuôi cấy, nhưng sử dụng lâu dài có thể ảnh hưởng đến hoạt động của tế bào.

2. Xét nghiệm Mycoplasma

- Thường xuyên kiểm tra ô nhiễm Mycoplasma (ví dụ như phương pháp PCR), các tế bào cần được loại bỏ kịp thời sau khi bị ô nhiễm.

IV. Giám sát tình trạng

1. Quan sát hàng ngày

- Kiểm tra hình thái tế bào, mật độ và màu sắc môi trường hàng ngày, kịp thời thay thế môi trường (thường là 2-3 ngày một lần).

Các hình thái bất thường (chẳng hạn như các tế bào tròn, nhiều mảnh vỡ) có thể gợi ý ô nhiễm hoặc thiếu dinh dưỡng.

2. Truyền thừa và lưu trữ đông lạnh

Số lần phân chia tế bào nguyên thủy có hạn (bình thường 5 - 10 thế hệ), cần kịp thời đóng băng tế bào thế hệ đầu.

- Dung dịch đông lạnh được khuyến cáo sử dụng huyết thanh DMSO+(hoặc môi trường đông lạnh đặc biệt), bảo quản nitơ lỏng sau khi gradient làm mát.