Xét nghiệm tế bào dương tính chỉnh sửa gen

Có thể đàm phánCập nhật vào03/04

Mô hình

Thiên nhiên của nhà sản xuất: Nhà sản xuất

Danh mục sản phẩm

Nơi xuất xứ

Tư vấn trực tuyến

Tổng quan

Sàng lọc tế bào dương tính với chỉnh sửa gen đề cập đến việc xác định và phân lập thành công các tế bào đã xảy ra biến đổi gen mục tiêu bằng các phương pháp cụ thể sau các thí nghiệm chỉnh sửa gen như CRISPR/Cas9. Các phương pháp sàng lọc phổ biến bao gồm sàng lọc kháng sinh (chẳng hạn như sử dụng các dấu hiệu gen kháng), sàng lọc đánh dấu protein huỳnh quang, xác minh PCR hoặc giải trình tự, v.v. Quá trình này rất quan trọng để có được các dòng tế bào đột biến đồng hợp hoặc dị hợp, nghiên cứu chức năng gen hoặc thực hiện xây dựng mô hình bệnh.

Chi tiết sản phẩm

Xét nghiệm tế bào dương tính chỉnh sửa gen: Chiến lược kỹ thuật và quy trình tối ưu hóa

Sàng lọc tế bào dương tính là khâu trung tâm của chỉnh sửa gen, hiệu quả của nó ảnh hưởng trực tiếp đến chu kỳ thí nghiệm và tỷ lệ thành công.

Lựa chọn mục tiêu và thách thức

Mục tiêu cốt lõi

Tách các tế bào đã chỉnh sửa thành công (ví dụ: genetic knockout/KO, knock-in/KI) từ các quần thể tế bào hỗn hợp.
Loại trừ sự can thiệp của tế bào hoang dã (khi tỷ lệ tế bào chưa chỉnh sửa cao, dễ dẫn đến âm tính giả).

Thách thức chính

Tổn thương tế bào: Sàng lọc lâu dài dẫn đến lão hóa tế bào (giảm mạnh khả năng tăng sinh sau khi truyền nguyên bào sợi lợn).
Rủi ro dương tính giả: Chỉnh sửa một phần chức năng gen không bị phá hủy hoàn toàn (ví dụ: đột biến shift không gây mất chức năng).
Nút thắt thông lượng: Đào tạo đơn nhân bản truyền thống cần trên 22 ngày và tỷ lệ dương tính không tới 20%.

II. Công nghệ sàng lọc chính và quy trình hoạt động

1- Tên đề tài: Giải pháp nâng cao hiệu quả đầu tư phát triển kết cấu hạ tầng thương mại (

Sử dụng cơ chế sửa chữa để kích hoạt biểu hiện đánh dấu huỳnh quang/kháng cho phép hình dung và phân loại nhanh:

Cơ chế sửa chữa	Thiết kế hệ thống báo cáo	Phương pháp lọc	lợi thế	trường hợp điển hình
Số	Mục tiêu phá hủy terminator protein huỳnh quang → Khôi phục biểu hiện	FACS phân loại GFP ⁺ tế bào	Trực quan và hiệu quả, phù hợp với KO	Nhà cung cấp CRISPR-DIY
Hình ảnh HDR	Các gen kháng chèn tái tổ hợp tương tự (như Puroᵣ)	Sàng lọc căng thẳng kháng sinh	Phù hợp với KI, chi phí thấp	Hạt CRISPR
SSA	Phá vỡ gây ra một chuỗi ủ sửa chữa → tái cấu trúc protein huỳnh quang	Dòng tế bào	Độ nhạy cao, độ lệch mục tiêu thấp	Xác minh chỉnh sửa đa gen

Quy trình hoạt động(Ví dụ về hệ thống NHEJ-GFP):

Xây dựng bao gồmTrình kết thúc GFP-TAAPhương tiện biên tập (sgRNA nhắm vào khu vực TAA).

Sau khi chuyển đổi tế bào, NHEJ sửa chữa biểu hiện terminator → GFP bị phá hủy.

Sử dụng sau 72hMáy đo tế bào dòng (như iQue) ®） Chọn GFP ⁺ Cell。

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

Chương trình đột pháChỉ cần 50 tế bào là có thể hoàn thành giám định kiểu gen, rút ngắn chu kỳ trên 15 ngày.

Thông số chính：

Số lượng tế bào: ≥ 50 (tỷ lệ phát hiện không đủ trong nhóm 20 tế bào, P<0,01).
Độ nhạy cắt enzyme: T7E1 có thể phát hiện hiệu quả chỉnh sửa ≥5%.
Các bước xác minh: Trình tự Sanger xác nhận loại đột biến (như chèn/mất).

Ký hợp đồng cung cấp Phần mềm tính toán định lượng rủi ro ngoài khơi – Safeti Offshore cho Trung tâm nghiên cứu và phát triển An toàn và Môi trường Dầu khí (CPSE) (

Phương pháp	Nguyên tắc	Cảnh áp dụng	Giới hạn
T7E1 Cắt enzyme	Cắt sai tạo ra chuỗi đôi dị nguyên	Màn hình ban đầu (chi phí thấp)	Độ nhạy thấp (≥5% tỷ lệ chỉnh sửa)
Trình tự Sanger	Đọc trực tiếp biến thể chuỗi	Xác minh đơn dòng	Thông lượng thấp
Giải trình tự thông lượng cao	Độ sâu che phủ mục tiêu đột biến	Phân tích đa gen/lệch mục tiêu	成本高

Tối ưu hóa hoạt động：

Trộn clone prescreening: FA-PCR phát hiện tỷ lệ chỉnh sửa nhóm,>30% sau khi sao chép menu.

Chính sách xác minh kép: T7E1 Sơ sàng dương tính Clone → Sanger sequencing confirmed (Tránh dương tính giả).

Lựa chọn kỹ thuật phù hợp với cảnh

a) Chọn loại tế bào

Loại tế bào	Phương pháp đề xuất	lý do
Tế bào gốc	Phương pháp nhận dạng tế bào vi lượng	Tránh lão hóa lâu dài (nguyên bào sợi lợn)
Dòng tế bào khối u	Xét nghiệm kháng sinh+FACS	Tăng sinh nhanh, kháng thuốc ổn định
iPSC	Hệ thống báo cáo HDR+Giải trình tự đơn dòng	Duy trì tính đa năng, cần chỉnh sửa chính xác cao

(2) Chọn loại biên tập

Loại Edit	Công nghệ sàng lọc	Các chỉ số chính
Loại bỏ gen (KO)	Hệ thống báo cáo NHEJ-GFP	GFP ⁺ Tỷ lệ tế bào (định lượng dòng)
Gõ gen (KI)	Xét nghiệm kháng sinh+xác minh PCR	Khả năng sống sót+Tăng cường chuỗi sườn
Đột biến điểm (PM)	T7E1+Giải trình tự sâu	Tần số đột biến>90%

Xét nghiệm tế bào dương tính chỉnh sửa gen

Sản phẩm tương tự Khuyến nghị