Protein khối u buồng trứng người 1 (OTUB1) protein tái tổ hợp

Protein khối u buồng trứng ở người1 (OTUB1) Protein tái tổ hợp

Tên sản phẩm: Protein khối u buồng trứng1 (OTUB1) Protein tái tổ hợp

Tên tiếng Anh:Tái kết hợp Otubain 1 (OTUB1)

HSPC263; OTB1; OTU1; Miền OTU, Ubiquitin Aldehyde ràng buộc 1; Enzyme du biquitinating OTUB1; Protease chế biến cụ thể ubiquitin OTUB1

Số mô hình:Sản phẩm CS-D009

Enzyme và kinase

Loài:Homo sapiens (con người)

Nguồn: Original Nuclear Expression

Vật chủE. coli

Mức độ endotoxin:<1.0EU/μg (được xác định bằng phương pháp LAL)

Định vị dưới tế bào:: Tế bào chất

Dự đoán trọng lượng phân tử:32,5kDa

Trọng lượng phân tử thực tế:40kDa (xem hướng dẫn để phân tích sự khác biệt)

Fragment và Tags:Met1 ~ Lys271 với N-terminal His Tag

Nguyên văn: Não tử khuyết căn cân (pH7.4， Chứa 0,01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose và Proclin300.)

Nhân vật: Bột đông khô

Độ tinh khiết:> 97%

Điểm đẳng điện:5.2

Ứng dụng:Kiểm soát tích cực; Chất miễn dịch; SDS-PAGE; WB.

Thông số kỹ thuật:10μg50μg200μg1mg5mg

1, chiết xuất protein mô

1) Thiết bị cần thiết: máy làm đá, bút đánh dấu, hai bộ ống EP 1,5ml (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), một hộp đá lớn, một hộp EP 1,5ml, găng tay, kéo mắt (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), mô tươi hoặc mô tủ lạnh được bảo quản ở -80 ℃, PBS (xử lý nhiệt độ và áp suất cao) được bảo quản trong tủ lạnh 4 ℃, pipet gun, đầu hút (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), hai bộ que mài (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), máy ly tâm lòng bàn tay, giấy lọc, dung dịch nứt khử nhiễm ba, flo benzyl sulfonate (PMSF, một chất ức chế protease, kịch độc), máy ly tâm, cốc, 2 × 2 SDS gel trên giống đệm, disulfitol (DTT), dao động, tấm bọt.

a. Máy làm đá làm đá;

b. Bút đánh dấu đánh dấu hai bộ ống EP;

c. Đặt hộp nước đá lớn, hộp ống EP vào băng, một bộ bút đánh dấu ống EP được đánh dấu tốt được đặt trong hộp nước đá lớn, một bộ bút đánh dấu khác được đánh dấu tốt ống EP được đặt trong hộp ống EP, đeo găng tay tốt, mang hộp ống EP, cắt mắt cỡ đậu tương (khoảng 100mg) mô tươi hoặc bảo quản trong -80 ℃ mô tủ lạnh;

d. Lấy PBS được bảo quản trong tủ lạnh 4 ℃, nhỏ giọt vào ống EP thêm 1 ml PBS, cắt nhỏ mô mắt (hành động nhanh), ly tâm trên lòng bàn tay, loại bỏ rõ ràng, nhỏ giọt vào ống EP thêm 1 ml PBS, mài que, 3000 ly tâm 10 phút, loại bỏ rõ ràng, giấy lọc hút càng nhiều chất lỏng còn lại trong ống càng tốt, ước tính thể tích trầm tích trong ống EP, các bước trên hoạt động trên băng càng tốt;

e. Lấy chất lỏng ly khai khử nhiễm ba lần từ tủ lạnh 4 ℃, -20 ℃ trong tủ lạnh lấy PMSF đặt trong hộp đá lớn, nhỏ giọt chất kết tủa vào ống EP 3-5 lần thể tích chất lỏng ly khai khử nhiễm ba lần (thường là 5 lần), sau đó thêm PMSF (tỷ lệ của cả hai là 94: 6), nghiền thanh mài (nứt đầy đủ trên băng 20-30 phút), các bước trên cần được tiến hành;

f. Máy ly tâm được làm lạnh trước, chất lỏng mô sau khi tách hoàn toàn 4 ℃, 10.000 chuyển ly tâm trong 10 phút;

g. Dùng nước máy rửa chén, đổ nước đơn vào, đun sôi trên bếp điện;

h. Chuẩn bị 2 × SDS gel cộng với bộ đệm mẫu (lưu trữ ở nhiệt độ bình thường), lấy DTT được bảo quản trong tủ lạnh -20 ℃, đặt trong hộp đá lớn, định lượng dung dịch ly tâm sau khi sử dụng pipet súng để hút vào một bộ ống EP khác (không hấp thụ trầm tích thấp hơn), nhấn chất lỏng trên: 2 × SDS: DTT=1: 0,8: 0,2 thêm 2 × SDS và DTT, ly tâm trên lòng bàn tay, sau đó cẩn thận chèn ống EP vào tấm bọt, đưa vào cốc đun sôi đun sôi trong 6-8 phút (công suất lò không được điều chỉnh quá lớn, để tránh nắp ống nổ(

I. Lấy miếng bọt ra bằng nhíp, để nguội trong hộp đá lớn 10 phút, ly tâm trên lòng bàn tay, rồi cho vào tủ lạnh - 20 độ C để dự phòng.

Lưu ý: Chất lỏng ly giải cũng có thể chọn chất lỏng ly giải đơn hoặc chất lỏng ly giải tế bào.

Chiết xuất protein tế bào dán tường (hàm lượng protein tế bào thường khoảng 1x10-9mg/tế bào)

1) Thiết bị cần thiết: máy làm đá, máy cạo tế bào, bút đánh dấu, hai bộ ống EP 1,5ml (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), hai hộp nước đá lớn, găng tay, chai nuôi cấy đầy đủ tế bào, PBS được bảo quản trong tủ lạnh 4 ℃, dung dịch lysis khử nhiễm ba, fluorobenzyl sulfonate (PMSF, một chất ức chế protease, rất độc), pipet gun, đầu hút (xử lý nhiệt độ và áp suất cao), giấy lọc, máy ly tâm, cốc, đệm trên gel 4 × SDS, disulfatol (DTT), tấm bọt.