Tế bào gốc chuột

Tế bào gốc chuộtPhương pháp truyền:

I. Phương pháp tiêu hóa của tế bào dán tường

1. Hút hoặc đổ dịch bồi dưỡng cũ trong bình.

Thêm 1 ml dung dịch tiêu hóa (trộn với EDTA) nhẹ nhàng lắc chai để tất cả các tế bào đáy chai được ngâm trong dung dịch.

3. Sau khi tiêu hóa 2 - 5 phút, đặt bình nuôi dưỡng dưới kính hiển vi để quan sát, phát hiện tế bào dán tường dần dần có xu hướng hình tròn, khi còn chưa nổi lên, bỏ đi dịch tiêu hóa, thêm vào dịch nuôi dưỡng để chấm dứt tiêu hóa.

4. Dùng ống hút thổi tế bào dán tường thành huyền dịch, lần lượt tiêm vào hai đến ba bình nuôi dưỡng khác, đặt trong hộp nuôi dưỡng 37 độ C tiếp tục nuôi dưỡng. Ngày hôm sau quan sát tình hình phát triển dán tường.

II. Di truyền của tế bào lơ lửng

1, Truyền trực tiếp

1) Sau khi để các tế bào lơ lửng từ từ lắng đọng ở đáy chai, sẽ hút sạch 1/2-2/3.

2) Sau khi thổi một hệ thống treo tế bào hình thành bằng ống hút, tiêm vào hai đến ba chai nuôi cấy khác, đặt trong một hộp nuôi cấy 37 ℃.

2, Truyền theo phương pháp ly tâm

1) Chuyển các tế bào cùng với nuôi cấy vào ống ly tâm, ly tâm 800-1000rpm, 5 phút.

(2) Loại bỏ Thượng Thanh, thêm dung dịch nuôi cấy mới vào trong ống ly tâm, dùng ống hút thổi để hình thành huyền dịch tế bào.

3) Truyền dịch tế bào được tiêm riêng vào hai đến ba chai nuôi cấy khác và được nuôi cấy trong một hộp nuôi cấy 37 ℃.

Tế bào gốc chuột5 sai lầm phổ biến trong nuôi cấy

Sai lầm 1:Một tế bào gốc ống nhỏ tan băng trong bồn nước trong một thời gian

Sửa chữa 1Các tế bào gốc rất nhạy cảm với quá trình tan băng, vì vậy điều quan trọng là phải đặt lọ trong bồn nước 37 độ C, giữ và xoay nhẹ cho đến khi các chất bên trong vừa tan băng. Sau đó, lọ nên được lấy ra khỏi bồn tắm ngay lập tức và chuyển đến bàn điều hành vô trùng. Hãy chắc chắn rằng bình nuôi cấy của bạn đã sẵn sàng trước khi rã đông để nó có thể được sử dụng ngay lập tức cho các tế bào tiêm chủng và được đặt trong một môi trường nuôi cấy.

Sai lầm 2:Trực tiếp ly tâm nguyên bào sau khi rã đông lọ

Sửa chữa 2:Chúng tôi không khuyên các tế bào ly tâm sau khi tan băng vì thủ tục ly tâm có hại hơn một lượng nhỏ dư lượng DMSO. Hãy nhớ thay thế môi trường vào ngày hôm sau sau khi khôi phục tế bào gốc để loại bỏ bất kỳ DMSO còn sót lại nào.

Sai lầm 3:Cho phép các tế bào nguyên sinh trở nên quá hợp nhất

Sửa chữa 3:Khi tăng trưởng đến 100, các tế bào nguyên sinh có thể già đi. Hãy nhớ rằng các tế bào gốc không phải là 100 tinh khiết, vì vậy điều quan trọng là giảm thiểu sự phát triển của các tế bào bị ô nhiễm. Chúng tôi khuyên bạn nên nuôi cấy các tế bào nguyên sinh khi các tế bào đạt đến 90-95% dung hợp.

Sai lầm 4:Các tế bào gốc có thể dễ dàng bị đóng băng trở lại

Sửa chữa 4:Thông thường chúng tôi không khuyên bạn nên đóng băng lại các tế bào nguyên sinh vì điều này có thể thúc đẩy lão hóa tế bào và/hoặc dẫn đến thay đổi chức năng. Các tế bào gốc rất nhạy cảm và đóng băng lại có thể dẫn đến chết hoặc tổn thương tế bào.

Sai lầm 5:Tế bào nguyên sinh có thể nhân lên vô hạn.

Sửa chữa 5:Không giống như các dòng tế bào, các tế bào thế hệ đầu có khả năng mở rộng hạn chế. Chúng tôi khuyên bạn nên thử nghiệm sớm với các tế bào nguyên sinh để ngăn chặn sự trôi dạt di truyền. Ngoài ra, nếu bạn đang sử dụng một loại tế bào khó tăng giá trị, bạn nên theo dõi chặt chẽ hình thái tế bào vì một số lượng nhỏ các tế bào hỗn hợp, chẳng hạn như nguyên bào sợi, có thể phát triển với số lượng lớn theo thời gian và trở thành tế bào chính.