3T3-L1 (nguyên bào sợi phôi chuột)

Phương pháp bảo quản tế bào:

a) Tế bào đông lạnh

1. Điều chế nuôi cấy đông lạnh với 10% DMSO hoặc glycerin, 10-20% huyết thanh bê;

2. Lấy các tế bào của giai đoạn tăng trưởng logarit, loại bỏ chất lỏng nuôi cấy cũ và rửa chúng bằng PBS.

Loại bỏ PBS, thêm một lượng vừa phải (bao gồm bề mặt đĩa petri) để tiêu hóa một lớp tế bào phát triển;

4. Ly tâm 1000rpm, 5 phút;

5. loại bỏ, thêm một lượng vừa phải chất lỏng nuôi cấy đông lạnh, thổi nhẹ bằng ống hút để làm cho các tế bào đồng nhất, đếm, điều chỉnh mật độ cuối cùng của các tế bào trong chất lỏng đông lạnh là 5 × 106/ml~1 × 107/ml;

Các tế bào được nạp vào ống lưu trữ đông lạnh, mỗi ống 1-1,5 ml;

Đánh dấu tên tế bào trên ống lưu trữ đông lạnh, thời gian lưu trữ đông lạnh và người vận hành;

8. Lưu trữ đông lạnh: quy trình lưu trữ đông lạnh tiêu chuẩn là tốc độ làm mát -1~2 ℃/phút; Khi nhiệt độ dưới -25 ℃, nó có thể tăng lên -5 ℃~-10 ℃/phút; Ở -100 ℃, nó có thể nhanh chóng được ngâm trong nitơ lỏng. Cũng có thể đặt ống lưu trữ đông lạnh với các tế bào trong tủ lạnh -20 ℃, sau đó đặt trong tủ lạnh -70 ℃, qua đêm, lấy ống lưu trữ đông ra và di chuyển vào thùng chứa nitơ lỏng.

Thông tin sản phẩm:

Giới thiệu sản phẩm:

Các bước hoạt động:

1), Thay thế một nửa hoặc toàn bộ môi trường trong 24-48 giờ trước khi đóng băng, để lại các tế bào trong giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân.

2), pha chế dung dịch bảo quản lạnh (pha chế trước khi sử dụng): lấy một ống ly tâm khác, thêm môi trường, huyết thanh, thêm dimethyl sulfoxide (DMSO) đến nồng độ 20% từng giọt, tức là làm dung dịch đông lạnh gấp đôi, đặt ở nhiệt độ phòng để sử dụng.

3) Ly tâm thu thập tế bào nuôi cấy, sử dụng môi trường huyết thanh để treo lại các tế bào, lấy một lượng nhỏ đình chỉ tế bào (khoảng 0. 1 ml) Đếm nồng độ tế bào và tỷ lệ sống sót trước khi đóng băng.

4), lấy một lượng tương đương của dịch đông lạnh với đình chỉ tế bào, từ từ thêm từng giọt vào đình chỉ tế bào, và lắc ống nghiệm, làm cho đình chỉ đông lạnh tế bào (nồng độ DMSO sau 5~10%), làm cho nồng độ tế bào 1~5 × 106cells/ml, trộn đều, được đặt trong ống bảo quản đông lạnh đã được dán nhãn, 1~2 ml/vial, và lấy một lượng nhỏ đình chỉ tế bào để phát hiện ô nhiễm. Sau khi niêm phong chặt chẽ, chỉ định tên tế bào, đại số, ngày tháng. Sau đó tiến hành đông lạnh.

Chú ý:

1) Các tế bào muốn bảo quản đông lạnh nên ở trạng thái phát triển tốt và tỷ lệ sống cao, khoảng 80-90% mật độ. Kiểm tra xem các tế bào có còn giữ được tính chất của chúng hay không trước khi đông lạnh và nên kiểm tra xem có kháng thể nào được tạo ra từ một đến hai ngày trước khi đông lạnh hay không.

2) Các tế bào trong nitơ lỏng có thể được đông lạnh trong một thời gian dài mà không ảnh hưởng đến sức sống của tế bào; Ở -70 độ có thể được bảo quản trong nhiều tháng.

3. Chú ý chất lượng thuốc bảo vệ đông lạnh. DMSO phải là loại thuốc thử, vô trùng và không màu (ở mức 0). 22micron FGLP Telflon lọc hoặc mua trực tiếp các sản phẩm vô trùng, chẳng hạn như Sigma D-2650, trong 5-10 ml khối lượng nhỏ, 4 ℃ bảo quản từ ánh sáng, không làm tan băng nhiều lần. Glycerol cũng phải là loại thuốc thử, được bảo quản tránh ánh sáng sau khi tiệt trùng bằng hơi nước áp suất cao. Sử dụng trong vòng một năm sau khi mở, vì sau khi lưu trữ lâu dài sẽ có độc tính đối với tế bào. Chất đông lạnh gấp đôi được chuẩn bị trước trong phương pháp này để tránh tổn thương tế bào do nhiệt giải phóng khi DMSO được thêm trực tiếp vào. Việc bổ sung chậm từng giọt vào hệ thống treo tế bào là làm cho các tế bào dần dần thích nghi với sự xâm nhập cao, có thể làm giảm tổn thương tế bào. DMSO có thể gây ra sự khác biệt của một số chủng tế bào bạch cầu, có thể được thay thế bằng 10% glycerin đông lạnh.

Sản phẩm công ty đang bán: