TRzol (thuốc thử chiết xuất RNA tổng số)

TRzol (thuốc thử chiết xuất RNA tổng số)

Giới thiệu sản phẩm:

Thuốc thử TRzol là thuốc thử chiết xuất tổng RNA trực tiếp từ tế bào hoặc mô. Nó duy trì tính toàn vẹn của RNA khi nó phá vỡ và hòa tan các tế bào. Ly tâm sau khi thêm chloroform, mẫu được chia thành các lớp mẫu nước và lớp hữu cơ. RNA được tìm thấy trong các lớp mẫu nước. Sau khi thu thập các lớp mẫu nước ở trên, RNA có thể được phục hồi bằng cách kết tủa isopropanol.

Cho dù đó là mô người, động vật, thực vật hay vi khuẩn, phương pháp này có tác dụng phân tách tốt hơn đối với một số lượng nhỏ và lớn các mô và tế bào. Sự đơn giản trong hoạt động của thuốc thử TRzol cho phép xử lý đồng thời nhiều mẫu. Tất cả các hoạt động có thể được thực hiện trong vòng một giờ. Tổng RNA được rút ra bởi TRzol có thể tránh ô nhiễm DNA và protein. Do đó, có thể thực hiện phân tích dấu vết RNA, lai tạo tại chỗ, lựa chọn poly(A)+, phiên mã in vitro, phân tích bảo vệ enzyme RNA và nhân bản phân tử.

Thuốc thử TRzol có thể thúc đẩy sự kết tủa của nhiều RNA có kích thước phân tử khác nhau trong các chi khác nhau. Ví dụ, RNA lấy từ gan chuột được điện di qua gel agarose và nhuộm với các thỏi ethyl bromide, có thể thấy nhiều dải trọng lượng phân tử cao không liên tục (các thành phần mRNA và hnRNA) giữa 7 và 15 kb, hai ribosome ưu thế~5 kb (28S) và~2 kb (18S) và RNA trọng lượng phân tử thấp giữa 0,1 và 0,3 kb (tRNA, 5S). Khi RNA rút được pha loãng với TE, tỷ lệ A 260/A 280 của nó là ≥ 1,8.

Lưu trữ sản phẩm: TRzol có thể được bảo quản ổn định trong 12 tháng ở nhiệt độ phòng. Tuy nhiên, để đạt được kết quả tốt nhất, chúng tôi khuyên bạn nên bảo quản trong môi trường 2-8 ℃. (Thao tác cụ thể xem chi tiết hướng dẫn)

I. DNA mẫu: phản ứng PCR đòi hỏi DNA mẫu, chẳng hạn như chiết xuất DNA từ tế bào, mô, máu, v.v.

II. mồi: hai mồi của phản ứng PCR, tương ứng với cả hai đầu của mẫu DNA để khuếch đại các khu vực cụ thể cần thiết, mồi cũng có thể được tổng hợp thành mồi được sử dụng trong quá trình nhân bản TA và các quá trình khác;

III. dNTPs: Bốn dNTPs là cần thiết trong phản ứng PCR, bao gồm deoxyadenoside (dATP), deoxythymidine (dCTP), deoxyguanosine (dGTP), deoxycytosine (dTTP), được sử dụng trong các quá trình sinh học như phân chia tế bào, tổng hợp DNA, v.v., để kéo dài và khuếch đại các chuỗi DNA mẫu để khuếch đại PCR;

IV. Taq DNA polymerase: phản ứng PCR cần polymerase, thường sử dụng Taq polymerase, và một số loại polymerase khác như PFU, Phusion, vv, được sử dụng để khuếch đại chuỗi DNA;

V. Giải pháp buffer PCR: phản ứng PCR có tác dụng đệm, điều chỉnh pH phản ứng, hydrogen thiosulfate SDS, các hợp chất hữu cơ phân tử nhỏ như formaldehyde, có thể tăng cường tính đặc hiệu của phản ứng PCR, do đó cải thiện hiệu quả phản ứng;

Hệ thống cắt enzyme: khuếch đại PCR thường liên quan đến các bước thử nghiệm như tái tổ hợp, xây dựng và giải trình tự, thường đòi hỏi hoạt động cắt enzyme.

MARK: Một tiêu chuẩn trọng lượng phân tử được sử dụng để xác định kích thước của các mảnh DNA.

VIII. Bộ dụng cụ tinh khiết DNA: để tinh khiết các sản phẩm phản ứng PCR;

Cháo trần; Thấp poly DT
Khi chọn Oligo dT, RNA phải có Poly A, vì vậy mRNA của sinh vật nhân chuẩn đều được áp dụng. RT thích hợp cho các chuỗi dài hoặc thậm chí là mRNA dài, đòi hỏi chất lượng cao đối với các mẫu RNA, không có ô nhiễm DNA rõ rệt, suy thoái RNA và đứt gãy RNA. Nếu bạn muốn khám phá mRNA mới cho phản ứng RT, bạn nên sử dụng mồi Oligo dT. Sử dụng mồi Oligo dT ổn định hơn mồi ngẫu nhiên và mồi cụ thể.
② Dẫn ngẫu nhiên
RT phù hợp với tất cả các loại RNA, đặc biệt là khi có ít mẫu (ví dụ, biểu hiện gen thấp). Khi chọn một mồi ngẫu nhiên, tất cả RNA được tạo khuôn trong phản ứng tổng hợp chuỗi cDNA và sau đó được thiết kế để khuếch đại cụ thể trong phản ứng PCR. Đồng thời chú ý đến mối quan hệ giữa lượng mồi ngẫu nhiên và tổng lượng RNA, thường được khuyến cáo rằng liều mồi ngẫu nhiên trên 5 µg RNA là 50 ng, và nếu liều mồi ngẫu nhiên trên 5 µg RNA vượt quá 250 ng, nó có thể dẫn đến tăng sản phẩm mảnh nhỏ (<500 bp) và giảm sản phẩm mảnh dài, toàn bộ chiều dài.
③ Dẫn cụ thể
Một mồi cụ thể di truyền (GSP) là một phần của một trình tự gen nhất định, bổ sung cho một mẫu. Các mồi này cần được thiết kế kết hợp với một trình tự đã biết của RNA mục tiêu. Mỗi RNA mục tiêu cần một bộ mồi đặc hiệu di truyền mới do sự gắn kết cụ thể của mồi và trình tự RNA. Do đó, khi phân tích nhiều mục tiêu, cần phải áp dụng nhiều mẫu RNA hơn. Hơn nữa nhiệt độ ủ vật dẫn khác nhau vốn không giống nhau, cho nên bình thường không đề cử sử dụng. Nếu cần sử dụng mồi cụ thể, nên tối ưu hóa nhiệt độ ủ.