Môi trường đặc biệt cho nguyên bào sợi ức thế hệ chuột

Mô tả hàng hóa:

Được tối ưu hóa cẩn thận bởi nhóm nghiên cứu, sau khi thử nghiệm lâu dài, sản phẩm này có thể duy trì trạng thái phát triển tốt của nguyên bào sợi thymocytes ở chuột.

Sản phẩm này đã chứa các thành phần khác nhau cần thiết cho sự phát triển của nguyên bào sợi thymogenic chuột mà không cần thêm bất kỳ thành phần nào và có thể được nuôi cấy trực tiếp với nguyên bào sợi thymogenic chuột.

Thành phần chính của sản phẩm

Vận chuyển và bảo quản

Vận chuyển:Vận chuyển nhiệt độ thấp trong hộp cách nhiệt có chứa túi nước đá sinh học

保存方法: Bảo quản 12 tháng theo điều kiện bảo quản tương ứng, môi trường được cấu hình tốt 2 ℃~8 ℃, bảo quản 2 tháng;

Kiểm soát chất lượng

Chú ý:

Chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học.

Một số thành phần của hệ thống nuôi cấy là các chất có hại cho sức khỏe con người, vui lòng không tiếp xúc với da tiếp xúc với chất lỏng của hệ thống nuôi cấy và bên trong thùng chứa với dư lượng chất lỏng của hệ thống nuôi cấy; Phần này của các chất có hại có nồng độ và tính nguy hiểm thấp, nếu tiếp xúc, rửa sạch bằng nước máy ngay lập tức.

Các bước nuôi cấy tế bào:

1. Chuẩn bị cơ sở đào tạo và bồi dưỡng điều kiện đông lạnh:

1) Chuẩn bị môi trường DMEM-H (thêm NaHCO3 1,5g/L), 90%; Huyết thanh bò thai, 10%. Môi trường lơ lửng cũng có thể được lựa chọn theo nhu cầu thí nghiệm để cho phép các tế bào 293T phát triển lơ lửng.

2) Điều kiện nuôi: pha khí: không khí, 95%; CO2, 5%. Nhiệt độ: 37 độ C, độ ẩm buồng nuôi cấy là 70% -80%.

3) Dung dịch đông lạnh: 90% môi trường, 10% DMSO, được sử dụng ngay bây giờ. Lưu trữ nitơ lỏng.

2. Xử lý tế bào:

1) Tế bào hồi sức: Các ống lưu trữ đông lạnh có chứa đình chỉ tế bào 1mL sẽ nhanh chóng lắc và tan băng trong bồn tắm nước 37 ℃, thêm vào môi trường 4mL để trộn đều. Ly tâm trong 4 phút trong điều kiện 1000 vòng/phút, bỏ đi chất lỏng trong, bổ sung 1 - 2 ml môi trường rồi thổi đều. Sau đó, tất cả đình chỉ tế bào sau đó được thêm vào chai nuôi cấy qua đêm (hoặc đình chỉ tế bào được thêm vào đĩa 10cm với khoảng 8ml môi trường nuôi cấy qua đêm). Thay dịch vào ngày hôm sau và kiểm tra mật độ tế bào.

2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.

Đối với các tế bào dán tường, thế hệ có thể tham khảo các phương pháp sau:

1. Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa canxi, ion magiê 1 - 2 lần.

2. Thêm 2ml dung dịch tiêu hóa (0,25% Trypsin-0,53mM EDTA) trong chai nuôi cấy, đặt trong hộp nuôi cấy 37 ℃ tiêu hóa trong 1-2 phút, sau đó quan sát sự tiêu hóa của tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào trở nên tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều hành, sau vài lần nhấp vào chai và thêm một lượng nhỏ môi trường để chấm dứt tiêu hóa.

3. Nhấn 6 - 8 ml/lọ bổ sung môi trường nuôi cấy, nhẹ nhàng đánh đều rồi hút ra, ly tâm trong điều kiện 1000 vòng/phút, bỏ đi chất lỏng trong, bổ sung 1 - 2 ml dung dịch nuôi cấy rồi thổi đều.

4. Chia dịch đình chỉ tế bào theo tỷ lệ 1:2 đến 1:5 vào đĩa hoặc chai mới có chứa 8ml môi trường.

3) Đóng băng tế bào: Khi tế bào phát triển tốt, có thể đóng băng tế bào. Khi các tế bào dán tường được đông lạnh, một lượng nhỏ được thêm vào sau khi loại bỏ môi trường, sau khi các tế bào tròn và tách ra, khoảng 1ml môi trường chứa huyết thanh được thêm vào ống đông lạnh, và 10% DMSO được thêm vào để đông lạnh.

Phương pháp bảo quản tế bào đông lạnh?

Phương pháp bảo quản lạnh I: ống đông lạnh được đặt ở 4 ℃ 30~60 phút → (-20 ℃ 30 phút *) → -80 ℃ 16~18 giờ (hoặc qua đêm) → bể nitơ lỏng vaporphase lưu trữ lâu dài.

Phương pháp bảo quản lạnh 2: ống đông lạnh được đặt trong máy làm mát có thể lập trình của chương trình đã thiết lập mỗi phút giảm 1-3 ℃ xuống dưới -80 ℃, sau đó đặt vào bể chứa nitơ lỏng vapor phase để lưu trữ lâu dài. Nhiệt độ -20 độ C không được vượt quá 1 giờ để ngăn chặn tinh thể băng quá lớn, khiến tế bào chết đi rất nhiều, cũng có thể bỏ qua bước này trực tiếp bỏ vào tủ lạnh -80 độ C, tỷ lệ sống sót giảm đi một chút.

Sản phẩm công ty đang bán:

1) Làm nóng nền văn hóa trong nồi tắm nước 37 ℃; Chuẩn bị một ống ly tâm vô trùng 15mL và thêm môi trường làm nóng sơ bộ 8mL.

2) Lấy tế bào đông lạnh ra khỏi bể nitơ lỏng, nhanh chóng đặt vào nồi nước 37 ℃ để làm ấm lại (có thể chuẩn bị một cốc sạch, chứa đầy nước 37 ℃, sau khi lấy ống đông lạnh tế bào, nhanh chóng đưa vào cốc, sau đó chuyển dần vào nồi nước). Nhẹ nhàng lắc ống lưu trữ để các tế bào có thể tan băng trong vòng 1-2 phút, để các tế bào có thể đi qua phần nhiệt độ dễ bị tổn thương (-5~0 ° C) càng sớm càng tốt. Chú ý miệng ống lưu trữ đông lạnh không được cho vào nước, tránh gây ô nhiễm.

3) Lau ống lưu trữ đông lạnh bằng cồn 75% trước khi đặt trong bàn siêu sạch, chuyển các tế bào trong ống vào ống ly tâm đã chuẩn bị, nhẹ nhàng thổi chất lỏng để các tế bào phân tán đều, giảm nồng độ DMSO và tránh tạo bọt khí khi thổi. Rửa tường ống 2 lần với môi trường tươi, tất cả đều được chuyển vào ống ly tâm.

4) 800rpm ly tâm 5 phút, bỏ sạch, thêm môi trường tươi, thổi vào đình chỉ tế bào.

5) Chuyển đình chỉ tế bào vào chai tế bào T25, bổ sung một lượng vừa phải của môi trường, nhẹ nhàng lắc chai tế bào để phân phối tế bào đồng đều, đặt trong hộp ấm để nuôi cấy.

6) Quan sát sự phát triển của các tế bào dán tường vào ngày hôm sau và thay đổi môi trường tươi để loại bỏ các tế bào chết. Tiếp tục nuôi cấy, đợi tế bào dài đến 80 - 90% hội tụ thì truyền lại bình thường. Thông thường, các tế bào vừa hồi phục phải trải qua 2-3 lần truyền, sau khi khôi phục sức sống tế bào mới có thể tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.