MG63 tế bào xương sarcoma ở người

I. Thuộc tính cơ bản của tế bào

Biệt danh tế bào:M-G63; MG63； Osteosarcoma ở người

Nguồn gốc loài: People

Tuổi tác giới tính: Nam;14 tuổi

Nguồn mô: xương; Xương Sarcoma

Đặc tính tăng trưởng: Tăng trưởng gắn tường

Hình thái tế bào: Nguyên bào sợi

Giới thiệu nền:Các tế bào MG-63 có nguồn gốc từ nam giới da trắng 14 tuổi bị u xương; Các tế bào MG-63 có thể được gây ra để sản xuất mức độ interferon cao. Các tế bào MG-63 biểu hiện các thụ thể TGF-beta I và II.

Lớp an toàn sinh học:1

Thông số kỹ thuật tế bào:1 × 106cells/T25 nuôi cấy chai hoặc 1mL đóng gói lưu trữ đông lạnh

Xét nghiệm Mycoplasma: Không

Biểu hiện gen:interferon

Cơ quan bảo quản:ATCC; CRL-1427 ECACC; 86051601； Trung tâm Tài nguyên Tế bào, Viện Y học Cơ bản Trung Quốc

Môi trường nuôi cấy:90% MEM + 10% FBS

Điều kiện nuôi dưỡng: pha khí:95% không khí+5% carbon dioxide; Nhiệt độ: 37 ℃

Điều kiện đông lạnh: Không lưu trữ huyết thanh, lưu trữ nitơ lỏng

Thời gian nhân:~ 28-38 giờ

STR鉴定位点 Amelogenin: X, Y CSF1PO: 10, 12 D13S317: 11. D16S539: 11, 12. D18S51: 12, 16 D19S433: 13, 14. D21S11:30; D2S1338: 17, 24. D3S1358: 15, 20; D5S818: 11, 12. D7S820: 10, 11.1 D8S1179:13 FGA: 21 và 25 Th01: 9.3 TPOX: 8, 11 VWA: 16, 19

II. Hoạt động nuôi cấy tế bào

1) tế bào hồi sức: sau đây nuôi cấy tế bào đông lạnh xử lý chỉ để tham khảo, các bước hoạt động cụ thể theo hướng dẫn sản phẩm là chính

Sẽ chứaCác ống lưu trữ đông lạnh của hệ thống treo tế bào 1 mL nhanh chóng lắc và tan băng trong bồn tắm nước 37 ℃, cộng với một môi trường 4 mL trộn đều. Ly tâm 3 phút trong điều kiện 1000 vòng/phút, bỏ chất lỏng, thêm 1-2 mL môi trường và thổi đều. Sau đó, tất cả đình chỉ tế bào sau đó được nuôi cấy qua đêm bằng cách thêm vào một chai nuôi cấy với một lượng vừa phải môi trường (hoặc bằng cách thêm đình chỉ tế bào vào một đĩa 6 cm với khoảng 4 mL môi trường nuôi cấy qua đêm). Ngày thứ ba thay dịch và kiểm tra mật độ tế bào.

2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.

a、 Khi các tế bào phát triển đến 80% diện tích của chai nuôi cấy, hãy loại bỏ chất lỏng nuôi cấy trong chai nuôi cấy 25cm2 và làm sạch các tế bào bằng PBS một lần;

b、 Thêm 0,25% dung dịch tiêu hóa khoảng 1 ml vào chai nuôi cấy, quan sát dưới kính hiển vi đảo ngược, sau khi tế bào co lại và tròn thêm dung dịch nuôi cấy để chấm dứt tiêu hóa, sau đó nhẹ nhàng thổi tế bào để nó rơi ra, sau đó chuyển huyền dịch vào ống ly tâm 15 ml, ly tâm 1000 vòng/phút;

c、 Bỏ qua việc làm sạch, các tế bào kết tủa được treo lại với môi trường 12ml, sau đó được truyền trong chai theo tỷ lệ 1: 2, và cuối cùng được đưa vào 37 ℃, 5% tế bào CO2 nuôi cấy;

d、 Sau khi tế bào dán vào tường, quan sát kết quả nuôi cấy, sau đó tiến hành nuôi cấy hoặc truyền dịch.

3) Đóng băng tế bào: Khi tế bào phát triển tốt, có thể đóng băng tế bào. Ví dụ như chai T2 dưới đây.

a、 Khi các tế bào phát triển đến 80% diện tích của chai nuôi cấy, hãy loại bỏ chất lỏng nuôi cấy trong chai nuôi cấy 25cm2 và làm sạch các tế bào bằng PBS một lần;

b、 Thêm 0,25% dung dịch tiêu hóa khoảng 1 ml vào chai nuôi cấy, nhìn dưới kính hiển vi đảo ngược, sau khi tế bào co lại và tròn, thêm dung dịch nuôi cấy để chấm dứt tiêu hóa, nhẹ nhàng thổi tế bào để nó rơi ra, sau đó chuyển huyền dịch vào ống ly tâm 15 ml, ly tâm 1000 vòng/phút;

c、 Đình chỉ lại các tế bào với một lượng dung dịch đông lạnh thích hợp (FBS: DMSO=9: 1) và đặt trong ống đông lạnh;

d、 Đầu tiên, các tế bào đông lạnh được đặt ở -20 ℃ 1,5 giờ, sau đó được chuyển đến -80 ℃ qua đêm, sau 24 giờ vào nitơ lỏng để bảo quản lâu dài. Sử dụng hộp làm mát chương trình có thể được đặt trực tiếp vào -80 ℃.

III. Lưu ý bồi dưỡng

1. Sau khi nhận được tế bào, trước hết quan sát xem bình tế bào có còn nguyên vẹn hay không, dịch bồi dưỡng có rò rỉ, đục ngầu hay không, nếu có hiện tượng trên xảy ra xin liên hệ với chúng tôi kịp thời.

2. Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng tế bào để hiểu thông tin liên quan đến tế bào, chẳng hạn như hình thái tế bào, môi trường được sử dụng, tỷ lệ huyết thanh, cytokine cần thiết, v.v., đảm bảo rằng các điều kiện nuôi cấy tế bào phù hợp, nếu các vấn đề xảy ra với tế bào do điều kiện nuôi cấy không phù hợp, trách nhiệm là trách nhiệm của khách hàng.

3. Lau bề mặt chai tế bào bằng rượu 75%, quan sát trạng thái tế bào dưới kính hiển vi. Do vấn đề vận chuyển, một số tế bào do sự thay đổi nhiệt độ và sự va chạm mạnh mẽ và vỡ thành các mảnh vỡ, là hiện tượng bình thường. Sau khi quan sát tình trạng tế bào tốt, 75% chai khử trùng rượu tường đặt chai T25 trong một môi trường 37 ℃ trong 2-4h.

4. Các tế bào dán tường có thể được tiêu hóa, các tế bào lơ lửng được trộn trực tiếp để thu thập các tế bào, 900 rpm-1000 rpm ly tâm trong 3 phút, loại bỏ. Thêm 5 mL PBS tái đình chỉ tế bào và 900 rpm-1000 rpm ly tâm trong 3 phút, tái đình chỉ tế bào với môi trường tươi và cấy vào một chai hoặc đĩa petri mới để nuôi cấy.

5. Yêu cầu khách hàng sử dụng môi trường có cùng điều kiện để nuôi cấy tế bào.

6. Đề nghị khách hàng chụp vài tấm ảnh tế bào trong 3 ngày đầu sau khi nhận được tế bào, ghi lại trạng thái tế bào, dễ dàng giao tiếp với bộ phận kỹ thuật của chúng tôi. Do nguyên nhân vận chuyển, các tế bào nhạy cảm cá nhân sẽ xuất hiện tình trạng không ổn định, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời, thông báo cho chúng tôi biết tình hình cụ thể của tế bào, để nhân viên kỹ thuật của chúng tôi theo dõi chuyến thăm lại cho đến khi vấn đề được giải quyết.

7. Tế bào này chỉ được sử dụng trong nghiên cứu khoa học.

Lưu ý: Môi trường vận chuyển (môi trường truyền dịch) không còn có thể được sử dụng để nuôi cấy tế bào, hãy thay thế bằng môi trường mới được điều chế theo các điều kiện nuôi cấy tế bào hướng dẫn để nuôi cấy tế bào. Nhận được đề xuất di truyền sau tế bào 1: 2.

Lưu ý: 1:2 là 1 chai T25, 2 chai T25 hoặc 2 đĩa 6cm. Không phải 1 chai T25 chuyền 2 đĩa 10cm.

Sản phẩm công ty đang bán: