Bộ dụng cụ apoptosis tế bào FITC Annexin V/PI

Bộ dụng cụ apoptosis tế bào FITC Annexin V/PI

Số hàng sản phẩm:Số F6012L

Thông số kỹ thuật sản phẩm:100T

Điều kiện bảo quản:

4℃Tránh ánh sáng làm lạnh, xin đừng đông lạnh.Ngày hết hạn Xem bao bì bên ngoài。

Đặc tính phổ:

FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm

PI: Ex/Em = 535/617 nm (với DNA)

Giới thiệu sản phẩm:

FITC-Annexin V / PIBộ dụng cụ apoptosis cung cấp một phương pháp nhanh chóng và dễ dàng bằng cách dán nhãn các tế bào apoptosis sớm (màu xanh lá cây) và các tế bào hoại tử hoặc apoptosis muộn(màu đỏ) Kiểm tra mức độ apoptosis của tế bào. Các sản phẩm có thể được phát hiện bằng các thiết bị kiểm tra huỳnh quang khác.

Chính sách Annexin V(Liên kết protein màng)- Va) Trọng lượng phân tử là35-36KDcủaCa2+Hạt chia organic (PS) Kết hợp chọn lọc.Hạt chia organic (PS) Chủ yếu phân bố ở bên trong màng tế bào, tức là bên cạnh tế bào tương. Trong giai đoạn đầu của quá trình apoptosis, các loại tế bào khác nhau sẽ chuyển phospholipid.Acyl được lật lên bề mặt tế bào và tiếp xúc với môi trường ngoại bào. Tại thời điểm này, sử dụng đầu dò huỳnh quang màu xanh lá câyFITCĐánh dấuChính sách Annexin VTức làFITC - Annexin V，Hạt chia organic (PSKết hợp với nhau, có thể sử dụng máy đo tế bào dòng chảy hoặc kính hiển vi huỳnh quang để trực tiếp phát hiện phosphatidyl chuyển tiếp, đặc điểm quan trọng của apoptosis tế bào nàyChinh. Đối với các tế bào hoại tử hoặc apoptosis muộn, vì tính toàn vẹn của tế bào đã bị phá hủy,FITC - Annexin VNó có thể đi vào bào tương và ở bên trong lớp phospholipid.PSLiên kết, từ đó cũng làm cho tế bào hoại tử xuất hiện huỳnh quang màu xanh lá cây.

mạc đường ruột muqueuses digestives (Propidium Iodide, PI) Là một loạiDNAKết hợp với thuốc nhuộm, nó có thể nhuộm các tế bào hoại tử hoặc các tế bào mịn của các tế bào bị mất tính toàn vẹn của màng tế bào trong giai đoạn apoptosis muộnNhân bào.PICó thể được thực hiện bởi488、532 hoặcSố lượng: 546 nmTia laser kích thích, hiện ra huỳnh quang màu đỏ.

Phương pháp sử dụng:

1. Thiết kế thử nghiệm:

Ống trống: các tế bào nhóm kiểm soát âm tính, không thêmFITC-Annexin V / PI. Để điều chỉnh điện áp.

Ống đơn nhiễm: tế bào nhóm đối chứng dương tính, chỉ thêmFITC-Annexin V/Chỉ thêmPI. Để điều chỉnh bồi thường.

Ống phát hiện: các tế bào được xử lý, cộng vớiFITC-Annexin V / PI. Sau khi bù điện áp được điều chỉnh tốt bằng ống trống và ống nhuộm đơn, có được dữ liệu dòng chảy cần thiết.

2. Thu thập tế bào:

(1) Đối với các tế bào lơ lửng:

a.Sau khi thực hiện kích thích apoptosis,1000 vòng / phútLy tâm5 phútBỏ đi, thu thập tế bào, dùng.PBSNhẹ nhàng treo lại các tế bào và đếm. Ghi chú:PBSTrọng huyền không thể tỉnh lược,PBSQuá trình treo lại đồng thời cũng đóng vai trò tẩy rửa tế bào, có thể đảm bảo tiếp theoFITC-Annexin VSự kết hợp.

b.取5×104 -1×105Một tế bào treo lơ lửng.1000 vòng / phútLy tâm5 phútBỏ cuộc, tham gia.100 µL 1 × Annexin VNhẹ nhàng treo lại các tế bào kết hợp với đệm.

c.tham gia5 µL FITC-Annexin VNhẹ nhàng trộn đều.

d.tham gia5 µL PINhiễm sắc dịch, nhẹ nhàng trộn đều.

e.Nhiệt độ phòng(20-25ºC)Tránh ánh sáng ủ10 - 15 phút. Có thể sử dụng lá nhôm để tránh ánh sáng. Các tế bào có thể được treo lại trong quá trình ủ2-3Thứ hai để cải thiện hiệu quả nhuộm màu.

b) Đối với tế bào dán tường:

a.Hút dịch nuôi cấy tế bào vào một ống ly tâm thích hợp,PBSRửa các tế bào dán tường một lần và thêm lượng dịch tiêu hóa vừa phải.(không chứaEDTA)Các tế bào tiêu hóa. Ủ ở nhiệt độ phòng đến khi nhẹ nhàng thổi có thể làm cho tế bào dán tường thổi xuống, hút hết dịch tiêu hóa của tế bào. Cần tránh tiêu hóa quá mức. Lưu ý: Đối với các tế bào dán tường, các bước tiêu hóa là rất quan trọng. Nếu thời gian tiêu hóa quá ngắn, các tế bào cần phải thổi mạnh để rơi ra, dễ gây tổn thương màng tế bào, do đó dẫn đến hoại tử tế bào dương tính giả; Nếu thời gian tiêu hóa quá dài, cũng dễ gây tổn thương màng tế bào và xuất hiện hoại tử tế bào dương tính giả, thậm chí sẽ ảnh hưởng đến phosphatidyl và phosphatidyl trên màng tế bào.FITC-Annexin VSự kết hợp từ đó quấy nhiễu việc phát hiện tế bào chết.

b.Thêm dịch nuôi cấy tế bào thu thập được ở bước trên, thổi nhẹ tế bào xuống, chuyển vào ống ly tâm,1000 vòng / phútLy tâm5 phútBỏ đi, thu thập tế bào, dùng.PBSNhẹ nhàng treo lại các tế bào và đếm. Lưu ý: Điều quan trọng là phải bổ sung nuôi cấy tế bào ở bước trên, một mặt có thể thu thập các tế bào bị apoptosis hoặc hoại tử đã bị đình chỉ, mặt khác, huyết thanh trong nuôi cấy tế bào có thể ức chế hoặc trung hòa phần còn lại một cách hiệu quả. Phần còn lại sẽ tiêu hóa và làm suy giảm những phần còn lại.FITC-Annexin VDẫn đến nhuộm màu thất bại.

c.取5×104 -1×105Một tế bào treo lơ lửng.1000 vòng / phútLy tâm5 phútBỏ cuộc, tham gia.100 µL 1 × Annexin VNhẹ nhàng treo lại các tế bào kết hợp với đệm.

d.tham gia5 µL FITC-Annexin VNhẹ nhàng trộn đều.

e.tham gia5 µL PINhiễm sắc dịch, nhẹ nhàng trộn đều.

f.Nhiệt độ phòng(20-25ºC)Tránh ánh sáng ủ10 - 15 phút. Có thể sử dụng lá nhôm để tránh ánh sáng. Các tế bào có thể được treo lại trong quá trình ủ2-3Thứ hai để cải thiện hiệu quả nhuộm màu.

3. Phân tích kết quả:

(1) Phát hiện tế bào dòng chảy:

a. Sau khi ủ hoàn thành, có thể trực tiếp thêm 400 μL 1 × Annexin V kết hợp với các tế bào treo lại đệm để phát hiện ngay lập tức, FITC-Annexin V được kích thích bởi laser 488 nm, phát hiện quang phổ phát xạ huỳnh quang ở 530 nm (kênh FITC), quang phổ phát xạ kênh PI khoảng 617 nm.

b. Trên biểu đồ phân tán của máy đo dòng chảy hai biến, góc phần tư dưới bên trái cho thấy các tế bào sống, là (FITC-Annexin V-/PI-); Góc phần tư dưới bên phải là các tế bào apoptosin sớm (FITCAnnexin V+/PI-); Góc phần tư phía trên bên phải là các tế bào hoại tử và apoptosis tiến triển (FITC-Annexin V+/PI+); Góc phần tư phía trên bên trái cho thấy các tế bào nhân trần, là (FITC-Annexin V-/PI+).

(2) Phát hiện kính hiển vi huỳnh quang:

a. 1000 vòng/phút ly tâm 5 phút, thu thập các tế bào, nhẹ nhàng treo lại các tế bào với 400 µL 1 × Annexin V liên kết đệm. Sau khi di chuyển các tế bào vào tấm 96 lỗ để lắng xuống trong một thời gian ngắn hoặc thực hiện phết tế bào, chúng được đặt dưới kính hiển vi huỳnh quang để quan sát.

FITC-Annexin V có thể sử dụng bộ lọc FITC, PI có thể sử dụng bộ lọc Cy3 hoặc Texas.

Chú ý:

1. Trước khi sử dụng, xin vui lòng ly tâm sản phẩm ngay lập tức đến đáy ống, sau đó tiến hành thí nghiệm tiếp theo.

2. Để giảm quá trình apoptosis của tế bào, quá trình ủ có thể được thực hiện trên băng, nhưng thời gian ủ kéo dài ít nhất cho đến khi30 phút。

3. Vì apoptosis là một quá trình nhanh chóng, mẫu được khuyến cáo sau khi nhuộm1 giờTiến hành phân tích bên trong.

4. Đối với các tế bào dán tường, tiêu hóa là một bước quan trọng. Khi tế bào dán gây ra apoptosis, nếu có tế bào nổi, cần thu thập tế bào nổi và tế bào dán sau đó hợp nhất nhuộm màu. Khi xử lý các tế bào dán tường, hãy cẩn thận để tránh các tế bào bị hư hại do con người gây ra. Thời gian tiêu hóa quá ngắn, các tế bào cần phải thổi mạnh để rơi ra, dễ dàng gây tổn thương màng tế bào,PItiêu thụ quá nhiều; Thời gian tiêu hóa quá dài, màng tế bào cũng dễ gây tổn thương, thậm chí có thể ảnh hưởng đến phosphatidyl và màng tế bào.FITC-Annexin VKết hợp. Khi tiêu hóa sẽ phủ kín đáy lỗ, khi lắc nhẹ tiếp xúc đầy đủ với tế bào, sau đó đổ hầu hết, sử dụng lượng nhỏ còn lại để tiêu hóa một thời gian, đợi khoảng trống giữa tế bào tăng lên, đáy chai có thể chấm dứt. Cố gắng không dùng trong dịch tiêu hóa.EDTA，EDTAẢnh hưởngChính sách Annexin VVớiPSSự kết hợp.

5. Sau khi tiêu hóa với các tế bào dán tường, nên phục hồi trong điều kiện nuôi cấy và môi trường xung quanh30 phútSau khi nhuộm màu, tránh dương tính giả.

6. Để tránh mất tế bào khi rửa, khi hút có thể sử dụng các tế bào lớnLời khuyênMũ trùm đầu nhỏLời khuyênHút đầu.

7. Nồng độ sử dụng thuốc nhuộm được xác định bởi các yêu cầu thí nghiệm cụ thể.

8. Thuốc nhuộm huỳnh quang đều tồn tại vấn đề dập tắt, trong quá trình bảo quản và sử dụng xin cố gắng chú ý tránh ánh sáng, để làm chậm quá trình dập tắt huỳnh quang.

9. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, hãy mặc quần áo thử nghiệm và vận hành bằng găng tay dùng một lần.