AFDye 555 NHS ester nhuộm tế bào

AFDye 555 NHS ester

(Alexa Fluor 555 NHS ester tương đương)

Thông tin sản phẩm

Mô tả sản phẩm

AFDye 555 là thuốc nhuộm hòa tan trong nước, ổn định ánh sáng mạnh với sản lượng lượng tử quang rất cao. AFDye 555 là thuốc nhuộm huỳnh quang màu cam có thể được kích thích bằng cách sử dụng các vạch phổ laser 488nm hoặc 532nm. Nó là một thay thế cho Cy3 hoặc tetramethylrodamine và có độ ổn định ánh sáng tốt hơn Cy3 trong các tế bào sống và cố định. Khả năng chịu đựng cao trong phạm vi pH 4-10.

AFDye555 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 555 NHS ester) là một phản ứng amin, thuốc nhuộm huỳnh quang màu cam, thường được sử dụng để đánh dấu protein hoặc kháng thể, polypeptide, oligonucleotide biến đổi amino, và các phân tử sinh học chứa amino khác. Dấu hiệu này thường có hiệu quả trong khoảng pH 7-9 zui, tạo thành các liên kết amide ổn định và cộng hóa trị.

Tính năng sản phẩm

Phương pháp bảo quản&vận chuyển

Bảo quản: -20ºC Bảo quản khô khỏi ánh sáng, hiệu quả trong 2 năm.

Vận chuyển: Vận chuyển túi đá.

Lưu ý

1) Tất cả các thuốc nhuộm huỳnh quang đều có vấn đề dập tắt, hãy cố gắng chú ý tránh ánh sáng để làm chậm quá trình dập tắt huỳnh quang.

2) AFDye NHS ester loạt thuốc nhuộm mặc dù có độ hòa tan trong nước nhất định, nhưng, nó rất khuyến khích để sử dụng DMSO, DMF hòa tan để pha chế nước mẹ, sau đó tiến hành các thí nghiệm đánh dấu tiếp theo. Bởi vì, trong các hệ thống hòa tan trong nước, các nhóm phản ứng này rất dễ bị thủy phân để tạo ra các dạng axit tự do không phản ứng.

3) Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc quần áo thử nghiệm và vận hành bằng găng tay dùng một lần.

I. Bước nhuộm (ví dụ như đánh dấu immunoglobulin IgG)

Hầu như tất cả các protein hoặc polypeptide có thể được dán nhãn bằng thuốc thử phản ứng amin (đầu dò). Dưới đây là các bước đánh dấu được tối ưu hóa cho kháng thể IgG, cho phép người dùng khuếch đại hoặc thu nhỏ hệ thống phản ứng dựa trên lượng protein của chính họ, nhưng để có được kết quả nhuộm mong muốn, nồng độ protein không được nhỏ hơn 2mg/ml. Do số lượng amino và vị trí bề mặt amino của các protein khác nhau (polypeptide) có sự khác biệt rất lớn, người dùng nên thiết lập ba nhóm thuốc thử phản ứng amin khác nhau trong thí nghiệm đầu tiên: tỷ lệ mol của protein để sàng lọc tỷ lệ mol có thể đạt được hiệu quả đánh dấu zuijia.

1.1 trong 1ml 0.1M carbon suan sodium hydrogen đệm hòa tan đầy đủ~10mg protein.

Ghi chú ①Nồng độ protein thường là 5-20mg/ml và tỷ lệ thành công của các khớp nối phụ thuộc rất nhiều vào nồng độ protein. Khi nồng độ dưới 2 mg/ml, nó có thể ảnh hưởng nghiêm trọng đến hiệu quả đánh dấu.

Ghi chú ②Hệ thống đánh dấu nên tránh bất kỳ chất nền có chứa amin nào như Tris, glycine, ammonium hoặc các protein ổn định khác như BSA, nếu dung dịch protein được đánh dấu bị ô nhiễm với các chất trên, thì phải lọc máu thành dung dịch đệm phosphate (PBS) 10-20 mM và thêm 0,1 mL dung dịch đệm bicarbonate 1M (pH 8,3-9,0) vào mỗi ml dung dịch protein đến độ pH mong muốn.

Chú ý.Nồng độ thấp của natri azide (<3 mM) hoặc thiosal (<1 mM) có trong dung dịch kháng thể không can thiệp vào phản ứng đánh dấu.

1.2 Thuốc thử phản ứng amin hòa tan (đầu dò) với DMF khan hoặc DMSO chất lượng cao (ví dụ: AFDye555 NHS ester) đến 10 mg/ml.

Lưu ý: Các dung dịch nước AFDye 488 NHS ester phải được sử dụng hiện tại và không thể bảo quản vì trong dung dịch nước, nó sẽ được thủy phân thành các axit tự do không hoạt động. Lưu trữ DMSO của AFDye 488 NHS ester có thể được bảo quản ở nhiệt độ ≤ -20 ℃, được khuyến nghị sử dụng trong vòng 2 tuần.

1.3 Một bên khuấy hoặc dung dịch protein xoáy, trong khi từ từ thêm thuốc thử phản ứng amin 50-100 µl (đầu dò).

Lưu ý: Số lượng thuốc thử phản ứng amin (đầu dò) được thêm vào là 0,5-1 mg, nói chung, khoảng 1/4-1/3 thuốc thử phản ứng amin được ghép nối với protein. Hiệu quả đánh dấu của các protein và thuốc thử đánh dấu khác nhau là khác nhau, hãy tối ưu hóa tỷ lệ này theo từng trường hợp cụ thể.

1,4 Khuấy chậm ở nhiệt độ phòng tránh ánh sáng ủ trong 1 giờ (hoặc lâu hơn).

1,5 [Tùy chọn] Kết thúc phản ứng bằng cách thêm 0,1ml hydroxylamine tươi 1,5M (pH 8,5), ủ hệ thống hydroxylamine ở nhiệt độ phòng 1h.

1.6 Tinh chế: Chọn một phương pháp thích hợp (ví dụ: lọc máu, cột P-30 hoặc cột PD-10) để tinh chế các sản phẩm được đánh dấu, loại bỏ các ion muối hoặc thuốc thử phản ứng amin không phản ứng.

1.7 Bảo quản: Protein được đánh dấu được bảo quản ở 2-8 ℃. Nếu nồng độ protein khớp nối tinh khiết<1 mg/ml, thêm BSA hoặc các protein ổn định khác 1-10 mg/ml. Với sự hiện diện của 2mM natri azide, 2-8oC có thể được bảo quản trong vài tháng. Nếu cần bảo tồn lâu hơn, cần bảo tồn tránh ánh sáng ở - 20 độ C sau khi phân phối, tránh nhiều lần lạnh tan băng.

B5-02=giá trị thông số P, (cài 5)

Đối với hầu hết các kháng thể như immunoglobulin IgG, hệ số hấp thụ mol là 203.000 và giá trị F/P từ 4 đến 9 là phù hợp nhất.
2.1AFDye555 đánh dấu protein F/P giá trị tính toán:
1) pha loãng một lượng nhỏ protein kết hợp tinh khiết với bội số chính xác PBS, xác định sự hấp thụ ánh sáng 280nm và 555nm trong đĩa đo màu 1cm;
2) Tính nồng độ protein trong mẫu: nồng độ mol protein=(A280- (A555 × 0,08)) × bội số pha loãng/203.000
3) Tính tỷ lệ đánh dấu: số mol thuốc nhuộm trên mỗi mol protein liên kết=A555 × bội số pha loãng/(150.000 × nồng độ mol protein)

Sản phẩm liên quan

- Written/Edited by V. Shallan (Bản quyền thuộc về MKBio)

Thượng Hải Mậu Khang Công nghệ sinh học Công ty TNHH là một đại lý, dụng cụ và phòng thí nghiệm hàng tiêu dùng và dịch vụ thí nghiệm tham gia nghiên cứu trong lĩnh vực khoa học đời sống và công nghệ sinh học, chủ yếu tham gia vào sinh học tế bào, thực vật học, sinh học phân tử, miễn dịch học, hóa sinh, protein học. Các lĩnh vực nghiên cứu và sản xuất thuốc thử sinh học và chẩn đoán. Công ty chúng tôi tuân thủ triết lý kinh doanh "lấy con người làm gốc, lấy sự chân thành làm niềm tin và giữ chữ tín trong hợp đồng". Kiên trì nguyên tắc "bảo đảm chất lượng" cung cấp sản phẩm chất lượng cao cho đông đảo khách hàng.