Nguyên bào sợi phôi chuột 3T3-L1 Thương hiệu

Thông tin sản phẩm:

Dung dịch đông lạnh: 55% môi trường cơ bản+40% FBS+5% DMSO

Nhiệt độ: Nitơ lỏng

Phương án nuôi cấy A (mặc định)：Môi trường tăng trưởng: DMEM+10% NCS+1% P/S

Điều kiện bồi dưỡng:Giai đoạn khí: Không khí, 95%; CO2， 5%, nhiệt độ: 37 ℃

Tỷ lệ thế hệ được đề xuất1:3-1:4

Mô tả nềnCác tế bào 3T3-L1 là một phân dòng liên tục của 3T3 (chuột bạch swiss) thu được bằng cách phân lập nhân bản. Khi các tế bào 3T3-L1 phân chia từ nhanh chóng đến đầy đủ và tiếp xúc bị ức chế, các tế bào 3T3-L1 bị đảo ngược theo hướng giống như chất béo trước. Trong nuôi cấy, nồng độ huyết thanh cao có thể thúc đẩy sự tích tụ chất béo trong các tế bào 3T3-L1.

Tuổi (Giới tính)Phôi

Loại tế bàoTế bào vĩnh sinh tự phát

Lớp an toàn sinh họcBSL-1

Biểu hiện receptorinsulin, được thể hiện

Cơ chế bảo quảnATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 6015

Vận chuyển và bảo quản:

Băng khô vận chuyển và phục hồi tế bào sống tốt

(1) 1mL đông lưu trữ đóng gói băng khô vận chuyển, sau khi nhận được -80 độ tủ lạnh lưu trữ qua đêm sau khi chuyển sang nitơ lỏng hoặc hồi sức trực tiếp, nếu bạn thấy rằng đá khô đã bay hơi sạch sẽ, nắp chai đông lưu trữ rơi ra, bị hỏng và ô nhiễm tế bào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi ngay lập tức.

(2) T25 chai hồi sức tế bào sống sót được vận chuyển ở nhiệt độ bình thường, sau khi nhận được hoạt động theo phương pháp xử lý sau khi nhận tế bào.

Xử lý tế bào sau khi tiếp nhận:

1) Sau khi nhận được tế bào, 75% rượu khử trùng tường chai đặt chai T25 trong 37 ℃ nuôi cấy hộp đặt khoảng 2-3 giờ, nếu bạn tìm thấy chai bị hỏng, tràn chất lỏng và ô nhiễm tế bào, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời sau khi chụp ảnh.

2) Vui lòng xác nhận trạng thái tế bào dưới kính hiển vi 4 hoặc 5X, trong khi chụp ảnh các tế bào vừa nhận được (10 × 20 × mỗi 2-3 và hình ảnh bên ngoài của chai nuôi cấy được lưu giữ, làm cơ sở cho trạng thái tế bào khi nhận được sau khi bán.

3) tế bào dán tường: các tế bào được đặt trong một buồng nuôi cấy 37 ℃ trong 2-3h, dưới kính hiển vi để xem sự phát triển của tế bào và tình trạng dán tường, một số tế bào dán tường trong quá trình vận chuyển nhanh sẽ rơi ra và rơi ra do rung động sau khi hình thành các cụm. Nếu mật độ tăng trưởng của tế bào dưới 60%, có thể loại bỏ môi trường truyền dịch trong chai nuôi cấy (nếu có tế bào không dán tường cần thu hồi ly tâm, treo lại vào chai nuôi cấy ban đầu), thêm môi trường mới được xây dựng 6-8mL, đặt vào trong hộp nuôi cấy tế bào để tiếp tục nuôi cấy. Nếu mật độ tăng trưởng tế bào đạt trên 70% -80%, có thể tiến hành xử lý di truyền tế bào. Trong quá trình truyền thừa, nếu các tế bào bị tách ra do rung động vận chuyển cần được thu hồi ly tâm.

Xử lý tế bào:

1) Phục hồi tế bào đông lạnh:

Các ống lưu trữ đông lạnh chứa 1 mL đình chỉ tế bào được lắc nhanh chóng và tan băng trong một bồn tắm nước 37 ° C, thêm vào một ống ly tâm với 4-6 mL môi trường để trộn đều. Ly tâm 3-5 phút trong điều kiện 1000RPM, loại bỏ chất lỏng thượng lưu, tế bào treo lại trên môi trường. Đình chỉ tế bào sau đó được thêm vào một chai (hoặc đĩa) có chứa 6-8ml môi trường để nuôi cấy 37oC qua đêm. Sự tăng trưởng tế bào và mật độ tế bào được quan sát dưới kính hiển vi vào ngày hôm sau.

2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.

Đối với việc truyền tế bào dán tường có thể tham khảo các phương pháp sau:

1. Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa canxi, ion magiê 1 - 2 lần.

2. Thêm 0,25% (w/v) -0,53 mM EDTA vào chai nuôi cấy (chai T25 1-2mL, chai T75 2-3mL), đặt trong một hộp nuôi cấy 37 ℃ tiêu hóa trong 1-2 phút (các tế bào khó tiêu hóa có thể kéo dài thời gian tiêu hóa một cách thích hợp), sau đó quan sát sự tiêu hóa của tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào trở nên tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều khiển, sau vài lần nhấp vào chai nuôi cấy thêm 3-4ml môi trường chứa 10% FBS để chấm dứt tiêu hóa.

3. Nhẹ nhàng đánh đều rồi hút ra, ly tâm 3 - 5 phút trong điều kiện 1000 vòng M, bỏ đi chất lỏng, bổ sung 1 - 2 ml chất lỏng nuôi cấy rồi thổi đều. Đình chỉ tế bào được chia thành chai T25 mới theo tỷ lệ 1: 2, thêm 6-8ml môi trường mới được cấu hình theo yêu cầu của hướng dẫn để duy trì sự phát triển của tế bào, truyền thừa tiếp theo được thực hiện theo tỷ lệ 1: 2~1: 5 theo tình hình thực tế.

3) Đóng băng tế bào: Sau khi nhận được tế bào, nên đóng băng một số hạt giống tế bào trong quá trình nuôi cấy 3 thế hệ đầu tiên để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

Sản phẩm công ty đang bán: