【JD-CW32H】Thiết bị kiểm tra dịch tả lợn châu Phi chọn công nghệ cạnh tranh, các loại thiết bị đồng bộ đầy đủ, nhận hàng là dùng! Bao giáo bao hội, trợ giúp heo ôn phòng ngự! 】。

Công nghệ cốt lõi của máy phát hiện dịch tả lợn châu Phi là gì? Tại sao có thể xác định chính xác virus

"Tại sao máy kiểm tra có thể phát hiện virus trong vòng vài chục phút?" "Sự khác biệt về độ chính xác giữa các thiết bị khác nhau, phương pháp kỹ thuật nào được cất giấu?" "Hỏa nhãn kim tinh" của máy kiểm tra dịch tả lợn châu Phi bắt nguồn từ sự đột phá của ba loại công nghệ cốt lõi. Những công nghệ này thực hiện phán đoán chính xác từ "có virus hay không" đến "có bao nhiêu virus", đằng sau là sự kết hợp sâu sắc giữa sinh học phân tử và công nghệ kỹ thuật.

Video tổng hợp báo cáo tin tức dựa trên luật sử dụng hợp lý – Fair use for news reporting ((

Máy phát hiện nhanh keo vàng là thiết bị của người nuôi dưỡng, bản chất công nghệ cốt lõi của nó là "sự kết hợp đặc biệt giữa kháng nguyên virus và kháng thể", tương tự như sự kết hợp chính xác của "khóa chìa khóa".

Trong thẻ xét nghiệm của loại thiết bị này có hai đường chính: đường thử nghiệm (đường T) cố định kháng thể đặc hiệu đối với protein P72 của virus sốt lợn châu Phi và đường kiểm soát chất lượng (đường C) cố định kháng thể kháng vàng. Khi được phát hiện, kháng nguyên virus trong mẫu sẽ liên kết với kháng thể được đánh dấu bằng vàng keo, tạo thành phức hợp "kháng thể nhãn vàng - kháng nguyên virus", khi phức hợp được gửi đến dòng T, nó sẽ bị bắt bởi kháng thể của dòng T, vàng keo kết hợp tạo thành dải màu đỏ, gợi ý dương tính; Các kháng thể nhãn vàng không liên kết sẽ tiếp tục chảy đến vạch C và bị mắc kẹt, tạo thành các dải màu đỏ để xác nhận thử nghiệm có hiệu quả.

Tính chính xác của kỹ thuật này đến từ "tính độc nhất" của kháng thể, kháng thể nhắm vào protein P72 sẽ chỉ liên kết với virus sốt lợn châu Phi, sẽ không phản ứng với các virus khác như sốt lợn, bệnh tai xanh, đặc hiệu có thể đạt trên 95%. Kinh nghiệm của Li Li, một hộ gia đình chăn nuôi rải rác ở Sơn Đông, xác nhận điều này: "Sử dụng thẻ vàng keo để kiểm tra lợn nóng, 15 phút cho ra kết quả, sau đó gửi đến phòng thí nghiệm để kiểm tra lại là nhất quán, không có tính toán sai lầm." Tuy nhiên, độ nhạy của nó có hạn, chỉ có thể phát hiện nồng độ virus trung bình cao (≥1000 bản/μL), phù hợp hơn cho sàng lọc sơ bộ khẩn cấp.

Công nghệ PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực: chẩn đoán chính xác "tiêu chuẩn vàng"

Công nghệ PCR là cốt lõi của việc phát hiện chẩn đoán chính xác các trang trại lợn vừa và nhỏ, cốt lõi của nó là "sự khuếch đại đặc hiệu của axit nucleic virus và theo dõi huỳnh quang", có thể nắm bắt chính xác sự hiện diện của virus một bản sao.

Logic phát hiện của các thiết bị như vậy có ba bước: đầu tiên phá hủy vỏ virus bằng dung dịch lysis và chiết xuất DNA độc đáo của nó (mục tiêu là gen B646L được bảo tồn cao, phổ biến cho tất cả các virus dịch tả lợn châu Phi); Sau đó, các mồi đặc hiệu được thêm vào để khóa các đoạn gen B646L như "neo định vị", khuếch đại các đoạn gen mục tiêu hàng triệu lần thông qua phản ứng tuần hoàn "thoái hóa - ủ - kéo dài" dưới tác động của DNA polymerase; Trong khi đó, đầu dò huỳnh quang phát ra tín hiệu huỳnh quang cùng với quá trình khuếch đại và thiết bị tính toán lượng virus ban đầu bằng cách theo dõi cường độ tín hiệu trong thời gian thực.

Dữ liệu thực tế từ thiết bị PCR TH-P800 cho thấy nó có thể phát hiện 10 bản sao/μL của virus, tương đương với một hạt muối trong một tấn nước. Zhao Lei, một bác sĩ thú y tại một trang trại lợn ở Hà Bắc, giải thích: "Ngay cả khi lợn mới bị nhiễm bệnh và lượng virus trong máu rất ít, sau khi tăng cường chu kỳ 30 lần, nó có thể bị bắt bởi tín hiệu huỳnh quang, đó là chìa khóa để nó có thể chẩn đoán sớm". Tính đặc biệt của kỹ thuật này bắt nguồn từ thực tế là trình tự mồi được thiết kế để nhắm mục tiêu gen B646L là virus sốt lợn châu Phi, không liên kết với gen của các virus khác.

Công nghệ kết nối RPA-CRISPR/Cas12a: Thế hệ mới của "bàn tay nhanh chính xác"

Là một công nghệ mới nổi lên trong những năm gần đây, thiết bị kết nối RPA-CRISPR đã đạt được sự cân bằng "nhanh và chuẩn", độ nhạy thậm chí vượt qua PCR truyền thống, cốt lõi là "tăng cường đẳng nhiệt+xác minh kép công cụ chỉnh sửa gen".

Quá trình phát hiện của nó bao gồm hai bước: bước thông qua công nghệ khuếch đại enzyme polymerase tái tổ hợp (RPA), trong điều kiện nhiệt độ không đổi 37-42 ℃, gen B646L của virus được khuếch đại đến mức có thể phát hiện được trong vòng 15 phút, giải quyết vấn đề tốn thời gian mà PCR truyền thống cần phải tăng và giảm nhiệt độ nhiều lần; Bước thứ hai kích hoạt crRNA được thiết kế sẵn của hệ thống CRISPR/Cas12a sẽ tìm thấy gen virus khuếch đại giống như một "wizard", kích hoạt hoạt động cắt của Cas12a để nó cắt các phân tử báo cáo huỳnh quang gần đó, giải phóng tín hiệu huỳnh quang.

Nghiên cứu của Viện Thâm Quyến cho thấy độ nhạy của công nghệ lên tới 20 copies/mL và có thể đạt được thử nghiệm chế độ kép so màu huỳnh quang: mẫu dương tính sẽ có màu vàng, đồng thời phát ra tín hiệu huỳnh quang, xác minh kép tránh được tính toán sai do nhiễu môi trường. Trong 12 mẫu máu lợn thực tế, độ chính xác đạt 100% và không phản ứng chéo với các virus bệnh lợn khác. Liu Feng, giám đốc thú y của một tập đoàn chăn nuôi, đánh giá: "Trước đây phải mất 2 giờ để sử dụng PCR, bây giờ phải mất 40 phút để có kết quả với thiết bị RPA-CRISPR, độ chính xác cao hơn, đặc biệt thích hợp để sàng lọc hàng loạt. ”

Mã số chung được xác định chính xác: Khóa "nhận dạng độc đáo" của virus

Dù là công nghệ nào, cốt lõi của việc xác định chính xác là khóa "các tính năng không thể thay thế" của virus sốt lợn châu Phi:

Mục tiêu đặc biệt: Tất cả đều được phát hiện với gen B646L được bảo tồn cao của virus, có mặt trong tất cả các chủng virus sốt lợn châu Phi và hiếm khi biến đổi, đảm bảo không bị bỏ sót hoặc tính toán sai;

Phóng đại tín hiệu: thông qua công nghệ PCR hoặc RPA để khuếch đại vi lượng axit nucleic của virus hàng triệu lần, sau đó thông qua huỳnh quang, vàng keo và các tín hiệu khác để chuyển đổi "virus vô hình" thành "kết quả có thể nhìn thấy";

Liên kết đặc hiệu: Sự kết hợp giữa kháng thể và kháng nguyên, mồi và gen giống như "dấu vân tay phù hợp", chỉ phản ứng với virus sốt lợn châu Phi, từ nguồn ngăn chặn dương tính giả do nhiễm chéo.

Một trường heo ở Hà Nam từng bị phán đoán sai do sử dụng thiết bị không tư chất, tổn thất hơn 100 nghìn Nhân dân tệ. Có thể thấy, độ chính xác của thiết bị không chỉ phụ thuộc vào loại công nghệ, mà còn liên quan chặt chẽ đến việc lựa chọn mục tiêu, chất lượng thuốc thử. Đối với người chăn nuôi, hiểu các nguyên tắc kỹ thuật này, có thể xác định rõ ràng hơn liệu thiết bị có phù hợp với nhu cầu sàng lọc khẩn cấp để chọn vàng keo hay không, chẩn đoán chính xác PCR, kiểm tra hàng loạt hiệu quả cao có thể tập trung vào công nghệ mới RPA-CRISPR.